[发明专利]母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法

说明书

本发明提供了一种母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，涉及理化检测技术领域。上述母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，首先将待测母乳样品经固相萃取预处理；随后利用LC‑MS质液联用色谱对预处理后的待测母乳样品进行检测，通过与叶酸和五甲基四氢叶酸的对照品溶液比较进行定量、定性分析。本申请母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法具有选择性好、特异性佳、灵敏度高等特点，在对叶酸和五甲基四氢叶酸分型定量上具有明显的优势，能够有效缓解现有微生物法、化学发光法、液相色谱法等母乳中叶酸的检测方法没有对叶酸和五甲基四氢叶酸进行分型定量的局限性。

技术领域

本发明涉及理化检测技术领域，尤其是涉及一种母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法。

背景技术

母乳是产后妇女乳房产生的汁液，能用作喂育新生儿之用，被誉为“白色血液”。母乳中含有碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、生物活性物质、免疫因子等，能满足新生儿的营养需要。因此，对新生儿而言，母乳是营养全面的最佳食物，出生后最初6个月的纯母乳喂养为最佳喂养新生儿方式，接着以持续母乳喂养并添加适当的补充食品的方式进行喂养，直至2岁或更长。国外研究表明，在3岁以下的婴儿食品中添加叶酸，有助于促进其脑细胞生长，并有提高智力的作用。

目前，国内外关于母乳成分的研究主要包括母乳成分方法学研究、乳母及婴幼儿对营养素代谢需要量、各成分与婴幼儿健康效应的关联、母乳成分变化规律及影响因素、母乳成分的干预研究、乳汁分泌机制研究等。其中研究最为广泛的是母乳成分含量分布、变化规律及影响因素。

叶酸由蝶啶、对氨基苯甲酸和L-谷氨酸组成，也叫蝶酰谷氨酸，是一种水溶性维生素，为人体细胞生长和繁殖所必需，可用于治疗由叶酸缺乏引起的贫血，也是孕妇的营养素补充剂。补充叶酸可显著降低新生儿神经管缺陷的发生率，也有助于降低心脑血管疾病的发生风险。目前，针对母乳叶酸和五甲基四氢叶酸的检测非常少见。

因此，研究开发出一种针对母乳叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，变得十分必要和迫切。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，该分析方法具有选择性好、特异性佳、灵敏度高等特点，在对叶酸和五甲基四氢叶酸分型定量上具有明显的优势，能够有效缓解现有微生物法、化学发光法、液相色谱法等母乳中叶酸的检测方法没有对叶酸和五甲基四氢叶酸进行分型定量的局限性。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供的一种母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述分析方法包括：

将待测母乳样品经固相萃取进行预处理；随后利用LC-MS质液联用色谱对预处理后的待测母乳样品进行检测，通过与叶酸和五甲基四氢叶酸的对照品溶液比较进行定量、定性分析。

进一步的，所述待测母乳样品包括人母乳、动物乳汁、复原乳中的任意一种。

进一步的，所述预处理包括对待测母乳样品依次进行水解孵育、弱碱皂化和固相萃取的步骤。

进一步的，所述水解孵育的温度为37℃，时间为1～24小时；

优选地，所述水解孵育的保护剂为1％抗坏血酸和0.5％巯基乙醇的水溶液。

进一步的，所述弱碱皂化为：

在水解孵育后的待测母乳样品中加入0.1％～5％氨水，随后60～90℃金属浴5～60min。

进一步的，所述固相萃取的萃取板为Waters Oasis MAX 96-well μElutionPlate。

进一步的，所述LC-MS质液联用色谱的色谱条件包括：