[发明专利]一种检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法

权利要求书

1.一种检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，其特征在于，所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法包括以下步骤：

步骤一，进行细菌内毒素标准品的配制：分别用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素标准品并混匀，混匀后将细菌内毒素标准品用内毒素检查用水进行梯度稀释，得到标准品系列，以及以内毒素检查用水作为阴性对照备用；

步骤二，进行待检测样品的预处理：将二棕榈酰磷脂酰胆碱待检测加入乙醇和吐温80的混合液配置成浓度为100mg/ml溶液，再将溶液使用细菌内毒素检查用水进行稀释到5mg/ml以下备用；

步骤三，进行供试品阳性对照的制备：取步骤二配置的100mg/ml溶液1ml，加入10μl浓度为50EU/ml的细菌内毒素标准品溶液，混匀5min得到含0.5EU/ml标准内毒素的供试品溶液作为供试品阳性对照；

步骤四，进行细菌内毒素的检测：根据步骤一的检测数据绘制标准曲线溶液；将步骤二和步骤三制备的溶液等溶液中加入鲎试剂，检测，并根据所述标准曲线标定待检测样品及供试品阳性对照中的细菌内毒素含量。

2.如权利要求1所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，其特征在于，所述步骤一中的细菌内毒素标准品的配制包括：

(1)用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素标准品并进行混悬处理；

(2)用细菌内毒素检查用水溶解鲎试剂，并进行标准曲线的可靠性验证试验；

(3)将配制的细菌内毒素标准品溶液置于反应容器中，加鲎试剂，并置于内毒素检测仪进行检测。

3.如权利要求2所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，其特征在于，所述混悬处理的时间为15～20min。

4.如权利要求2所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，其特征在于，所述细菌内毒素标准品溶液的浓度为0.005～5EU/mL，所述反应容器为无热原酶标板或无热原玻璃管。

5.如权利要求1所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，其特征在于，所述步骤二中的待检测样品的预处理包括：

(1)通过预先经过250℃干热灭菌1h的金属取样勺或玻璃勺，或购买具有无热原标识的无热原一次性塑料勺，称量待检测样品粉末于经过250℃干热灭菌1h的干净玻璃管中；

(2)通过称取粉末后，将乙醇和吐温80混合液按照比例配置，并混匀不少于5min直到完全溶解，再用溶液溶解样品；

(3)利用加热、超声波设备对步骤(2)得到的溶液进行处理，加速溶解。

6.如权利要求5所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，其特征在于，所述浸泡温度为35～37℃，所述浸泡时间为20～30min；

所述超声设备的功率为200～300W，所述超声时间为10～20min。

7.如权利要求5所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，其特征在于，所述吐温80可被包括吐温20和聚氧乙烯蓖麻油在内的非离子型表面活性剂替代；

所述乙醇可被包括无水乙醇、纯度不低于95％乙醇，无水甲醇、纯度不低于95％甲醇在内的醇类以及四氢呋喃、二甲基亚砜替代；

所述乙醇和吐温80混合液的配置比例为2.5：0.3～2.5：6.0，优选为2.5：2.7。

8.如权利要求5所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，其特征在于，所述待检测样品溶液的至少用内毒素检查用水稀释20倍，浓度不高于5mg/mL，检测限达1EU/g。

9.如权利要求1所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，其特征在于，所述步骤三中的细菌内毒素的检测包括：

(1)根据细菌内毒素标准品的检测数据绘制标准曲线；

(2)将配制的所述待检测样品溶液置于反应容器中，加入配制的鲎试剂，置于内毒素检测仪中进行检测；

(3)利用绘制的标准曲线标定待检测样品溶液中的细菌内毒素含量；

(4)所使用的鲎试剂可为动态浊度法或动态显色法鲎试剂。

10.如权利要求9所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，其特征在于，所述鲎试剂最低检测限为0.005EU/ml；若使用最低检测限为0.001EU/ml，则检测限为0.2EU/g；

所述置于内毒素检测仪中进行检测的方法包括：自动混匀30s，检测温度37±1℃，检测波长340～660nm。