[发明专利]一种检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法

说明书

本发明属于细菌毒素检测技术领域，公开了一种检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，分别用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素标准品并混匀，混匀后将细菌内毒素标准品用内毒素检查用水进行梯度稀释，得到标准品系列，并以内毒素检查用水作为阴性对照；将二棕榈酰磷脂酰胆碱待检测加入乙醇和吐温80的混合液配置成溶液并稀释；向制备的溶液中加入鲎试剂，检测，并根据标准曲线标定待检测样品的细菌内毒素含量。本发明提供的检测细菌内毒素的方法操作简单，检测所用时间短，稀释过程中不产生浑浊，不产生干扰，不容易造成二次污染，能广泛应用于此类常用的非水溶性药品检测中。

技术领域

本发明属于细菌毒素检测技术领域，尤其涉及一种检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法。

背景技术

目前，细菌内毒素是G-菌细胞壁上的特有结构，其主要成分是脂多糖，具很强的热原活性。当细菌内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时，则可导致不同程度的内毒素血症。因此，对于注射剂及其生产中所用的原辅料都应进行细菌内毒素的控制，以确保产品质量，保障用药安全。但是，现有细菌内毒素的检测方法在测二棕榈酰磷脂酰胆碱存在严重干扰，并且操作复杂，耗费的时间较长，容易造成二次污染。因此，亟需设计一种新的检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有细菌内毒素的检测方法在测难溶性样品二棕榈酰磷脂酰胆碱时存在严重干扰，并且操作复杂，耗费的时间较长，容易造成二次污染。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法。

本发明是这样实现的，一种检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法，所述检测二棕榈酰磷脂酰胆碱细菌内毒素的方法包括以下步骤：

步骤一，进行细菌内毒素标准品的配制：分别用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素标准品并混匀，混匀后将细菌内毒素标准品用内毒素检查用水进行梯度稀释，得到标准品系列，并以内毒素检查用水作为阴性对照备用；

步骤二，进行待检测样品的预处理：将二棕榈酰磷脂酰胆碱待检测加入乙醇和吐温80的混合液配置成浓度为100mg/ml溶液，再将溶液使用细菌内毒素检查用水进行稀释到5mg/ml以下备用；

步骤三，进行供试品阳性对照的制备：取步骤二配置的100mg/ml溶液1ml，加入10μl浓度为50EU/ml的细菌内毒素标准品溶液，混匀5min得到含0.5EU/ml标准内毒素的供试品溶液作为供试品阳性对照，

步骤四，进行细菌内毒素的检测：根据步骤一的检测数据绘制标准曲线溶液；将步骤二和步骤三制备的溶液中加入鲎试剂，检测，并根据所述标准曲线标定待检测样品及供试品阳性对照中的细菌内毒素含量。

进一步，所述步骤一中的细菌内毒素标准品的配制包括：

(1)用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素标准品并进行混悬处理；

(2)用细菌内毒素检查用水溶解鲎试剂，并进行标准曲线的可靠性验证试验；

(3)将配制的细菌内毒素标准品溶液置于反应容器中，加鲎试剂，并置于内毒素检测仪进行检测。

进一步，所述混悬处理的时间为15～20min。

进一步，所述细菌内毒素标准品溶液的浓度为0.005～5EU/mL。

进一步，所述反应容器包括无热原酶标板或无热原玻璃管。

进一步，所述步骤二中的待检测样品的预处理包括：

(1)通过预先经过250℃干热灭菌1h的金属取样勺或玻璃勺，或购买具有无热原标识的无热原一次性塑料勺，称量待检测样品粉末于经过250℃干热灭菌1h的干净玻璃管中；