[发明专利]血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法

权利要求书

1.一种血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述测定方法包括：

(a)、样品预处理：将在试验样品中加入混有内标的蛋白沉淀剂，随后离心取上清液，得到待测样品；

所述混有内标的蛋白沉淀剂主要由美金刚-D6甲醇溶液经乙腈稀释制得；

(b)、对待测样品中五氟利多采用正离子模式进行LC-MS/MS分析，采集检测数据；根据血清中五氟利多的标准曲线，得到血清中五氟利多的含量。

2.根据权利要求1所述的血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述美金刚-D6甲醇溶液的浓度为0.01～1mg/mL，优选为0.1mg/mL；

优选地，所述美金刚-D6内标的浓度为1～100ng/mL，优选为12ng/mL。

3.根据权利要求1所述的血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述试验样品为被检测对象的血浆或血清。

4.根据权利要求1所述的血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述步骤(a)包括以下步骤：

将100μL试验样品溶液加入200μL内标工作液中1200rpm混匀10分钟；随后4000rpm/min离心10分钟，移取上清液100μL；然后将移取后的上清液4000rpm/min再离心5分钟，得到待测样品。

5.根据权利要求1所述的血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述LC-MS/MS分析的液相色谱条件包括：

液相分析色谱柱：XBridge BEH C18 2.5μm 3.0*50mm；

柱温为30～50℃，进样量为1～20μL；

优选地，柱温为40℃，进样量为5μL。

6.根据权利要求5所述的血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述液相色谱梯度洗脱程序为：

A相为0.05～0.25％甲酸-水溶液，B相为0.05～0.25％甲酸-甲醇水溶液；

优选地，A相为0.1％甲酸-水溶液，B相为0.1％甲酸-甲醇水溶液；

梯度洗脱程序为：

7.根据权利要求1所述的血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述LC-MS/MS分析的质谱检测是正离子扫描模式，多重反应监测模式检测；

所述质谱检测的离子源参数包括：

8.根据权利要求1所述的血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述步骤(B)血清中五氟利多的标准曲线按照以下方法建立得到：

配置五氟利多标准工作溶液，随后与内标溶液混合后离心取上清液；将五氟利多标准工作溶液的上清液经LC-MS/MS分析检测，得到五氟利多在血清中的色谱和质谱数据；

按照内标法对五氟利多的色谱数据和色谱峰面积对五氟利多标准工作溶液的浓度进行回归分析，得到血清中五氟利多的标准曲线。

9.根据权利要求8所述的血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述血清中五氟利多的标准曲线为：

y＝0.00756x+0.00064(r＝0.9967)。

10.根据权利要求8所述的血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述五氟利多标准工作溶液的配置血浆为动物的血清或血浆；

所述动物的血清或血浆包括猪的血清或血浆、羊的血清或血浆、马的血清或血浆、牛的血清或血浆，优选为小牛的血清或血浆。