[发明专利]血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法

说明书

本发明提供了一种血清中五氟利多的LC‑MS/MS测定方法，涉及理化检测技术领域。所述血清中五氟利多的LC‑MS/MS测定方法，首先在试验样品中加入混有内标的蛋白沉淀剂，随后离心取上清液得到待测样品；然后对待测样品中五氟利多采用正离子模式进行LC‑MS/MS分析；根据血清中五氟利多标准曲线，得到血清中五氟利多的含量。本申请上述测定方法通过加入有机溶剂使蛋白质沉淀，通过沉淀析出蛋白质而去除生物样品中大部分蛋白质，之后离心取上清液，采用多重反应监测正离子模式进行LC‑MS/MS分析。同时，采用美金刚‑D6为内标，实现对五氟利多高通量的定性定量检测。

技术领域

本发明涉及理化检测技术领域，尤其是涉及一种血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法。

背景技术

五氟利多(penfluridol)系二苯丁哌啶类衍生物，是第一个应用于临床的口服长效抗精神类药物，可用于治疗急、慢性各型精神分裂症，且各病程均有效，血浆半衰期为24-48h。本药物主要不良反应，如类震颤麻痹，静坐不能，肌张力不全，不安等，近年来常有文献报道误服引起的中毒事件。

目前国内外对生物样品中五氟利多的测定方法报道较少，主要有气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱法(GC/MS)和液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)，文献报道HPLC法灵敏度和特异性相对较低，不能适应高通量要求的血药浓度监测。GC-MS法使用固相萃取法进行样品预处理，操作繁琐，所需时间长，有机溶剂使用量大，测定时样品用量大，通常需要3mL血清，并且分析时间需要18min。LC-MS/MS法预处理多用液液萃取或固相萃取方法，提取过程复杂。

因此，研究开发出一种利用内标法进行检测的，不需要复杂预处理萃取过程的血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，变得十分必要和迫切。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，该测定方法通过加入有机溶剂使蛋白质沉淀，通过沉淀析出蛋白质而去除生物样品中大部分蛋白质，之后离心取上清液，采用多重反应监测负离子模式进行LC-MS/MS分析。同时，采用美金刚-D6(Memantine-d6 Hydrochloride)为内标，实现对五氟利多高通量的定性定量检测。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供的一种血清中五氟利多的LC-MS/MS测定方法，所述测定方法包括：

(a)、样品预处理：将在试验样品中加入混有内标的蛋白沉淀剂，随后离心取上清液，得到待测样品；

所述混有内标的蛋白沉淀剂主要由美金刚-D6甲醇溶液经乙腈稀释制得；

(b)、对待测样品中五氟利多采用正离子模式进行LC-MS/MS分析，采集检测数据；根据血清中五氟利多的标准曲线，得到血清中五氟利多的含量。

进一步的，所述美金刚-D6甲醇溶液的浓度为0.01～1mg/mL，优选为0.1mg/mL；

优选地，所述美金刚-D6内标的浓度为1～100ng/mL，优选为12ng/mL。

进一步的，所述试验样品为被检测对象的血浆或血清。

进一步的，所述步骤(a)包括以下步骤：

将100μL试验样品溶液加入200μL内标工作液中1200rpm混匀10分钟；随后4000rpm/min离心10分钟，移取上清液100μL；然后将移取后的上清液4000rpm/min再离心5分钟，得到待测样品。

进一步的，所述LC-MS/MS分析的液相色谱条件包括：

液相分析色谱柱：XBridge BEH C18 2.5μm 3.0*50mm；