[发明专利]一种基于NGS平台的微生物定量方法及试剂盒

权利要求书

1.一种基于NGS平台的微生物定量方法，其特征在于，所述微生物定量方法包括：

将针对目标微生物的基因组上目标区域的引物和镜像序列与待测样本混合，进行文库制备及测序，根据测序结果计算目标微生物含量；

所述镜像序列包括引物结合区和非引物结合区，所述引物结合区的核酸序列与所述目标微生物的基因组上目标区域的引物结合区的核酸序列相同，所述非引物结合区与所述目标微生物的基因组上目标区域的非引物结合区互补或为其反向核酸序列。

2.根据权利要求1所述的基于NGS平台的微生物定量方法，其特征在于，所述计算的公式如式(1)所示；

Cp＝(Ci×Rp×Vi)/Ri 式(1)；

其中，Cp为目标微生物的含量，Rp为目标微生物扩增到序列数，Ci为镜像序列的投入浓度，Vi为投入镜像序列后与投入镜像序列前的体积比，Ri为镜像序列扩增到序列数。

3.根据权利要求1或2所述的基于NGS平台的微生物定量方法，其特征在于，所述镜像序列被插入到质粒中。

4.根据权利要求1-3任一项所述的基于NGS平台的微生物定量方法，其特征在于，所述方法还包括设计引物的步骤；

优选地，所述设计引物包括：获取目标微生物基因组序列，筛选目标区域，针对目标区域设计引物。

5.根据权利要求1-4任一项所述的基于NGS平台的微生物定量方法，其特征在于，所述文库制备包括：对目标微生物的基因组上目标区域及其镜像序列进行PCR扩增，得到文库；

优选地，所述PCR包括多重PCR。

6.根据权利要求1-5任一项所述的基于NGS平台的微生物定量方法，其特征在于，所述测序包括靶向测序。

7.根据权利要求1-6任一项所述的基于NGS平台的微生物定量方法，其特征在于，所述目标微生物包括鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、卡他莫拉菌、铜绿假单胞菌或结核分枝杆菌中的任意一种或至少两种的组合。

8.根据权利要求7所述的基于NGS平台微生物定量方法，其特征在于，所述鲍曼不动杆菌的引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列；

优选地，所述鲍曼不动杆菌的镜像序列的核酸序列包括SEQ ID NO.3所示的序列；

优选地，所述金黄色葡萄球菌的引物的核酸序列包括SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的序列；

优选地，所述金黄色葡萄球菌的镜像序列的核酸序列包括SEQ ID NO.6所示的序列；

优选地，所述肺炎克雷伯菌的引物的核酸序列包括SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的序列；

优选地，所述肺炎克雷伯菌的镜像序列的核酸序列包括SEQ ID NO.9所示的序列；

优选地，所述卡他莫拉菌的引物的核酸序列包括SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示的序列；

优选地，所述卡他莫拉菌的镜像序列的核酸序列包括SEQ ID NO.12所示的序列；

优选地，所述铜绿假单胞菌的引物的核酸序列包括SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的序列；

优选地，所述铜绿假单胞菌的镜像序列的核酸序列包括SEQ ID NO.15所示的序列；

优选地，所述结核分枝杆菌的引物的核酸序列包括SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17所示的序列；

优选地，所述结核分枝杆菌的镜像序列的核酸序列包括SEQ ID NO.18所示的序列。