[发明专利]一种用于检测鸡肉掺假的试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 202210616039.0 | 申请日： | 2022-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN114752691A | 公开（公告）日： | 2022-07-15 |
| 发明（设计）人： | 蓝航镇;徐好仪;潘道东;吴振 | 申请（专利权）人： | 宁波大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11;G01N33/558;G01N33/58 |
| 代理公司： | 宁波诚源专利事务所有限公司 33102 | 代理人： | 王莹;袁翊朦 |
| 地址： | 315211 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 鸡肉 掺假 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于检测鸡肉掺假的试剂盒，其特征在于：包括用于扩增鸡Cytb基因的正向引物PF2和反向引物PR2，
正向引物PF2：5’-Biotin-CATGACCCAAATCCTCACCG-3’；
反向引物PR2：5’-Fam-TCCTTGAAGGTAGGACCGTA-3’。
2.根据权利要求1所述的用于检测鸡肉掺假试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括胶体金试纸，该胶体金试纸包括PVC背板、设置在PVC背板上且依次沿样品流动方向从下往上分布、且依次部分重叠的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；
所述金标垫上标记有胶体金颗粒和胶体金蛋白的复合物；
所述硝酸纤维素膜上沿样品流动方向分别标记有兔抗Fam抗体的检测线T线、标记有BSA-Biotin的质控线C线。
3.一种应用有如权利要求2所述的用于检测鸡肉掺假试剂盒的检测方法，其特征在于：包括
步骤S1、提取待检测样品的DNA，并采用所述正向引物PF2和反向引物PR2进行PCR扩增；
步骤S2、制备胶体金试纸；
步骤S3、将所述步骤S1扩增后的PCR产物滴在胶体金试纸上，将胶体金试纸的样品垫进入展开液中，5min内观察；
如果检测线和质控线同时显红色，则表示胶体金试纸有效，并且检测到样品含有鸡源性成分；
如果质控线为红色，检测线为无色，则表示胶体金试纸有效，并且未检测到样品含有鸡源性成分。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述步骤S2包括
步骤S2-1、在金标垫加入金标垫处理液后，于40℃干燥1h；
步骤S2-2、再在金标垫上加入胶体金蛋白溶液，于40℃干燥1h；
步骤S2-3、将1mg/mL的兔抗Fam抗体划在硝酸纤维素膜表面作为检测线T线；
步骤S2-4、将1mg/mL的BSA-Biotin划在硝酸纤维素膜表面作为质控线C线。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述步骤S2-1中，所述金标垫处理液包括BSA、海藻糖、蔗糖、吐温-20、TritionX-100；
其中，BSA的质量分数为5％，海藻糖的质量分数为10％，蔗糖的质量分数为2％、吐温-20的质量分数为2％、TritionX-100的质量分数为2％。
6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：在所述步骤S3中，扩增后的PCR产物取15μL滴在胶体金试纸的样品垫上。
7.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：在所述步骤S3中，所述展开液由0.01MPBS组成，pH为7.4。
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