[发明专利]一种用于检测鸡肉掺假的试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测鸡肉掺假的试剂盒，包括用于扩增鸡Cytb基因的正向引物PF2和反向引物PR2，具有检测成本低、操作简单、特异性好、灵敏度高、可视化程度高的优点。本发明还公开一种应用有用于检测鸡肉掺假试剂盒的检测方法，同样具有检测成本低、操作简单、特异性好、灵敏度高、可视化程度高的优点，可以用于肉制品中鸡源性成分掺假的检测。

技术领域

本发明涉及鸡肉掺假检测领域，具体涉及一种用于检测鸡肉掺假的试剂盒及检测方法。

背景技术

肉类产品不仅是人们餐桌上的重要组成部分，也是人体的重要营养来源。随着人民生活水平以及生活质量的日益提高，人们对于食品安全问题也越来越重视。许多无良商家在高成本的牛羊肉中掺入成本较低的鸡肉等以获取高额利益，这一现象给消费者和相关食品安全监督部门造成了严重的困扰。因此为了维护消费者的合法权益，保护消费者的生命健康，维持市场经济可持续发展，我们需要研发出一种简单、低成本、特异性高的肉制品掺假现场检测方法。

肉制品作为最具掺假风险的食品之一，其检测手段主要是基于蛋白质水平和核酸水平。蛋白质水平的检测方法主要包括酶联免疫法、光谱、质谱、色谱和蛋白电泳等。但蛋白质不稳定容易在预处理和加工过程中变性，导致实验结果重复性差且灵敏度低。核酸扩增是分子生物学研究中一个重要的工具，其极高的稳定性和扩增能力完美的克服了蛋白质分析的局限性，使其更适合于鉴定掺假的肉类产品。常用的基于核酸的掺假检测方法包括聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光PCR、数字PCR、交叉引物扩增(CPA)、循环介导的等温扩增(LAMP)和重组酶聚合酶扩增(RPA)。PCR被认为是鉴定掺假肉制品的黄金标准，并已成功用于鉴定牛肉、羊肉、猪肉和鸡肉。

而PCR扩增产物的分析技术，例如琼脂糖凝胶电泳法，需要配置凝胶电泳仪而成本较高、操作相对比较复杂、检测时间相对较长，又如荧光定量PCR技术需要昂贵的仪器而成本较高、操作相对复杂、检测时间相对较长。

因此，可继续改进。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术的现状，提供一种成本较低、操作简单方便、检测时间较短的用于检测鸡肉掺假的试剂盒。

本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术的现状，提供一种应用有上述的用于检测鸡肉掺假试剂盒的检测方法。

本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：一种用于检测鸡肉掺假试剂盒，其特征在于：包括用于扩增鸡Cytb基因的正向引物PF2和反向引物PR2，

正向引物PF2：5’-Biotin-CATGACCCAAATCCTCACCG-3’；

反向引物PR2：5’-Fam-TCCTTGAAGGTAGGACCGTA-3’。

胶体金试纸的结构具体是，所述试剂盒还包括胶体金试纸，该胶体金试纸包括PVC背板、设置在PVC背板上且依次沿样品流动方向从下往上分布且依次部分重叠的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；

所述金标垫上标记有胶体金颗粒和胶体金蛋白的复合物；

所述硝酸纤维素膜上沿样品流动方向分别标记有兔抗Fam抗体的检测线T线、标记有BSA-Biotin的质控线C线。

本发明解决上述第二个技术问题所采用的技术方案为：一种应用有如上述的用于检测鸡肉掺假试剂盒的检测方法，其特征在于：包括

步骤S1、提取待检测样品的DNA，并采用所述正向引物PF2和反向引物PR2进行PCR扩增；

步骤S2、制备胶体金试纸；

步骤S3、将所述步骤S1扩增后的PCR产物滴在胶体金试纸上，将胶体金试纸的样品垫进入展开液中，等待至少5min后观察；