[发明专利]高效液相色谱法测定阿哌沙班起始原料对甲氧腙的方法

说明书

本发明提出的是一种高效液相色谱法测定阿哌沙班起始原料对甲氧腙的方法，首先配制羟基腙、甲酯腙、对甲氧腙、氯代腙的系统适用性溶液，取待测阿哌沙班本品配制供试品溶液和对照溶液；取系统适用性溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，系统适应性溶液中羟基腙、甲酯腙、对甲氧腙、氯代腙依次出峰，再精密量取对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。本发明能够有效分离对羟基腙、甲酯腙、对甲氧腙和氯代腙，可有效控制对甲氧腙中的杂质含量，对于终产品阿哌沙班的质量控制有着不可或缺的意义。

技术领域

本发明涉及的是一种高效液相色谱法测定阿哌沙班起始原料对甲氧腙的方法，属于化学检测分析技术领域。

背景技术

阿哌沙班是由百时美施贵宝公司和辉瑞公司联合研制的一种新型口服直接Xa因子抑制剂，于2011年3月在欧盟批准上市，商品名Eliquis，临床用于预防进行择期髋关节或膝关节置换术的成年患者出现的静脉血栓栓塞症（VTE）。2012年12月28日，FDA批准阿哌沙班用于非瓣膜性房颤（AF）患者卒中和全身性栓塞的预防。2014年8月21日，FDA批准阿哌沙班用于深静脉血栓（DVT）和肺栓塞（PE）的治疗以及降低初始化治疗后复发性DVT和PE的风险。

对甲氧腙是阿哌沙班本品原料合成的重要起始物料，也是最终产品中需要进行控制的基因毒性杂质，其质量控制关系到最终产品的质量。其衍生的相关杂质，尤其是含有苯胺结构的对茴香胺、含有卤代苯结构的氯代腙等等，均可被视为基因毒性杂质。为了保证阿哌沙班最终产品的质量，并降低最终产品中基因毒性杂质的风险，同时减轻最终产品质量控制的工作量、提高生产质检环节的效率，需要对对甲氧腙进行全面的杂质控制。然而目前尚无文献报道该产品的有关物质分析方法，现有阿哌沙班的制备工序中也无任何针对对甲氧腙及其相关杂质的精确测定或分离控制过程，在起始物料中严格控制对甲氧腙的相关杂质，按照ICH M7指导原则以及杂质控制策略树，可有效减少在成品中控制基因杂质的工作，从而减轻质量控制环节的工作量。

发明内容

本发明的目的在于解决现有阿哌沙班药品制备和质量检测过程中存在的上述问题，通过适当的摸索性实验确定并提出一种高效液相色谱法测定阿哌沙班起始原料对甲氧腙的方法，并严格进行方法验证，保证方法的科学严谨，满足研发和生产的需求，对于控制对甲氧腙的质量起到关键性作用。

本发明的技术解决方案：高效液相色谱法测定阿哌沙班起始原料对甲氧腙的方法，具体包括如下步骤：

1）系统适用性溶液配制：分别取羟基腙、甲酯腙、对甲氧腙、氯代腙各约5mg，分别置10ml的量瓶中，加混合溶剂（乙腈-水=50:50）超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备溶液；分别精密量取各储备液1ml，置同一200ml量瓶中，用混合溶剂（乙腈-水=50:50）稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。

2）供试品溶液配制：避光操作，临用新制，取本品适量，精密称定，加混合溶剂（乙腈-水=50:50）溶解并稀释制成每1ml中约0.5mg的溶液，作为供试品溶液。

3）对照溶液配制：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加混合溶剂（乙腈-水=50:50）稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置10ml量瓶中，摇匀作为对照溶液。

4）对甲氧腙的液相色谱检测：取系统适用性溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，系统适应性溶液中羟基腙、甲酯腙、对甲氧腙、氯代腙依次出峰，各杂质及主峰的相互分离度均大于1.5，再精密量取对照溶液和供试品溶液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图。