[发明专利]复合益生菌、其制备方法及其抗HP和抗口腔龋病中的应用

说明书

本申请公开了一种复合益生菌、其制备方法及其在抗HP和抗口腔龋病中的应用。该制备方法包括分别取格氏乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌和酪酸梭菌进行活化；将活化的酪酸梭菌菌悬液接种至发酵液体培养基中培养后，继续向发酵体系中接种干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌菌悬液，继续发酵2～3h后；继续向发酵体系中接种格氏乳杆菌菌悬液，发酵完成，收获含有复合益生菌的发酵液。由此制得的复合益生菌冻干制剂不仅具有能够改善HP引起的小鼠胃炎症反应的作用，还能够为Wistar大鼠抗龋病提供帮助，具有抗幽门螺杆菌和平衡口腔微生态的双重作用和更加广泛的应用前景。

技术领域

本申请涉及复合益生菌技术领域，尤其涉及复合益生菌、其制备方法及其抗HP和抗口腔龋病中的应用。

背景技术

龋病，是一种源于细菌性感染的日腔常见疾病，严重时可继发牙髓炎和根尖周炎，甚至会引起领骨炎症。变形链球菌(Streptococcusmutans，S.mutans)是目前被公认的主要致龋菌，其能在牙齿表面形成牙菌斑生物膜，为致病菌的聚集和生长提供微生态环境，增强致病菌本身的致病力，还能增强其对宿主免疫系统和抗生素治疗的抵抗作用。研究表明，很多疾病的发生都与日腔微生态失衡有着密切关联，其中龋齿就是日腔微生物失衡致使牙菌斑生物膜生成，导致牙体硬组织发生慢性进行性破坏的疾病。牙菌斑是由微生物菌体以及微生物分泌的胞外多糖、蛋白质和矿物质薪附在牙釉质固体表面或者牙根上的生物膜复合体。

益生菌是一类定植于人体内，对宿主有益的活性微生物，它能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。目前已知的产生具有口腔抗龋病的益生菌可大致分为两大类，乳杆菌和乳酸球菌。乳杆菌包括干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)等，乳酸球菌主要有嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)和乳酸乳球菌(Lactococcus lactic)等。

发明内容

有鉴于此，本申请的目的在于提供一种具有口腔抗龋病和抗幽门螺杆菌的复合益生菌。

第一方面，本申请实施例公开了一种复合益生菌的制备方法，包括以下步骤：

分别取格氏乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌和酪酸梭菌进行活化；

将活化的酪酸梭菌菌悬液接种至发酵液体培养基中培养4～5h后；

向发酵体系中接种干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌菌悬液，继续发酵2～3h后；

继续向发酵体系中接种格氏乳杆菌菌悬液，发酵完成，收获发酵液，所述发酵液即包含所述复合益生菌。

在本申请实施例中，所述发酵液体培养基成分为，乳糖62.21g/L，酵母浸粉46.25g/L，酵母蛋白胨19.12g/L，磷酸二氢钠17.25g/L，磷酸氢二钠1.75g/L，MgSO₄·7H₂O0.96g/L，MnSO₄·5H₂O 0.063g/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.17g/L。

在本申请实施例中，酪酸梭菌发酵的条件为：初始pH 5.8～6.0、温度37℃、接种量1％，采用25％的氨水保证发酵过程中pH值5.5，同时通入氮气保持罐压0.03～0.04MPa，发酵过程中同时维持搅拌125rpm。

在本申请实施例中，干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌菌的接种量均为3～4v/v％。

在本申请实施例中，干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌菌的接种同时补入发酵体系25％体积的所述发酵液体培养基。

在本申请实施例中，格氏乳杆菌的接种量为1.5～2v/v％。

在本申请实施例中，格氏乳杆菌的接种同时补入发酵体系10％体积的所述发酵液体培养基。