[发明专利]基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的制备方法有效
| 申请号： | 202210624792.4 | 申请日： | 2022-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN114958767B | 公开（公告）日： | 2022-12-27 |
| 发明（设计）人： | 王清路;蒋永强 | 申请（专利权）人： | 健颐生物科技发展(山东)有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/077;C12N15/85;C12N15/113;A61K35/30;A61P25/16;A61P25/00 |
| 代理公司： | 淄博启智达知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 37280 | 代理人： | 任永哲 |
| 地址： | 250021 山东省济南市槐荫区*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 hipsc 细胞 构建 神经 干细胞 制剂 制备 方法 | ||
1.一种基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）hNSC的构建
采用人成纤维细胞制备成纤维细胞源hiPSC，将hiPSC诱导生成hNSC；
（2）miR-93基因突变pegRNA构建
设计miR-93基因gRNA和miR-93基因突变模板及反转录引物序列，将miR-93基因gRNA、Scaffold序列和miR-93基因突变模板及反转录引物序列合成miR-93基因突变pegRNA；
（3）miR-302d基因突变pegRNA构建
设计miR-302d基因gRNA和miR-302d基因突变模板及反转录引物序列，将miR-302d基因gRNA、Scaffold序列和miR-302d基因突变模板及反转录引物序列合成miR-302d基因突变pegRNA；
（4）基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的获得
将PE2系统mRNA、miR-93基因突变pegRNA和miR-302d基因突变pegRNA混合，然后加入到hNSC中进行电转染，收集细胞，分选单克隆细胞，扩大培养，筛选，得到基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂；
步骤（2）中所述的miR-93基因gRNA为SEQ ID NO.1所示的序列，Scaffold序列为SEQ IDNO.2所示的序列，miR-93基因突变模板及反转录引物序列为SEQ ID NO.3所示的序列；
步骤（2）中所述的miR-93基因突变pegRNA为SEQ ID NO.4所示的序列；
步骤（3）中所述的miR-302d基因gRNA为SEQ ID NO.5所示的序列，Scaffold序列为SEQID NO.2所示的序列，miR-302d基因突变模板及反转录引物序列为SEQ ID NO.6所示的序列；
步骤（3）中所述的miR-302d基因突变pegRNA为SEQ ID NO.7所示的序列。
2.根据权利要求1所述的基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的hiPSC诱导生成hNSC是hiPSC在神经干细胞诱导培养基上诱导生成hNSC。
3.根据权利要求1所述的基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的制备方法，其特征在于步骤（4）中所述的PE2系统mRNA的制备方法是按照pCMV-PE2-P2A-GFP质粒的序列合成PE2系统mRNA。
4.根据权利要求1所述的基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的制备方法，其特征在于步骤（4）中所述的电转染的时间为72-80h。
5.根据权利要求4所述的基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的制备方法，其特征在于步骤（4）中所述的电转染的时间为72h。
6.根据权利要求1所述的基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的制备方法，其特征在于步骤（4）中所述的筛选为测序筛选。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于健颐生物科技发展(山东)有限公司，未经健颐生物科技发展(山东)有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202210624792.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
