[发明专利]一种检测产志贺毒素大肠埃希氏菌的CPA引物组合及方法

权利要求书

1.一种检测产志贺毒素大肠埃希氏菌的CPA引物组合，由引物组II或引物组III组成，

引物组II，用于检测待测物是否含stx1亚型STEC，包括：

剥离引物stx1-1的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

剥离引物stx1-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

交叉引物stx1-3的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；

检测引物stx1-4的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

检测引物stx1-5的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；

引物组III，用于检测待测物是否含stx2亚型STEC，包括：

剥离引物stx2-1的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；

剥离引物stx2-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；

剥离引物stx2-3的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；

剥离引物stx2-4的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；

交叉引物stx2-5的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；

交叉引物stx2-6的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；

检测引物stx2-7的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示；

检测引物stx2-8的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；

检测引物stx2-9的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示；

检测引物stx2-10的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示；

检测引物stx1-4/stx2-7/stx2-8的5'末端标记有异硫氰酸荧光素基团，检测引物stx1-5/stx2-9/stx2-10的5'端标记有生物素荧光基团。

2.含权利要求1所述的CPA引物组合的试剂，其特征在于：

含引物组II的CPA反应体系如下：

成分保存浓度加样量

Bst酶5U/μL 1～3μL

Bst酶缓冲液10X 2.5μL

剥离引物stx1-1为SEQ ID NO.6：10μmol/L 0.5～1.5～μL

剥离引物stx1-2为SEQ ID NO.7：10μmol/L 0.5～1.5μL

交叉引物stx1-3为SEQ ID NO.8：10μmol/L 2.0～4.0μL

检测引物stx1-4为SEQ ID NO.9：10μmol/L 1.25～3.25μL

检测引物stx1-5为SEQ ID NO.10：10μmol/L 1.25～3.25μL

DNA样品5μL

双蒸水补足体积至25μL

总体积25μL

含引物组III的CPA反应体系如下：

成分保存浓度加样量

Bst酶5U/μL1～3μL

Bst酶缓冲液10X 2.5μL

剥离引物stx2-1为SEQ ID NO.11：10μmol/L 0.5～1.5～μL

剥离引物stx2-2为SEQ ID NO.12：10μmol/L 0.5～1.5μL

剥离引物stx2-3为SEQ ID NO.13：10μmol/L 0.5～1.5μL

剥离引物stx2-4为SEQ ID NO.14：10μmol/L 0.5～1.5μL

交叉引物stx2-5为SEQ ID NO.15：10μmol/L 2.0～4.0μL

交叉引物stx2-6为SEQ ID NO.16：10μmol/L 2.0～4.0μL

检测引物stx2-7为SEQ ID NO.17：10μmol/L 1.25～3.25μL

检测引物stx2-8为SEQ ID NO.18：10μmol/L 1.25～3.25μL

检测引物stx2-9为SEQ ID NO.19：10μmol/L 1.25～3.25μL

检测引物stx2-10为SEQ ID NO.20：10μmol/L 1.25～3.25μL

DNA样品5μL

双蒸水补足体积至25μL

总体积25μL

其中Bst酶缓冲液的成分为200～500mM Tris-HCl、100～300mM (NH₄)₂SO₄、100～300mMKCl、20mM MgSO₄、质量百分比1％～5％Triton X-100，25℃环境下，pH值为8.0～8.8。