[发明专利]一种食品微生物检测的探针、芯片、试剂盒及方法

说明书

本发明提供了针对常见焙烤食品微生物大肠杆菌(Escherichia coli)、斯特菌(Listeriamonocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)、创伤弧菌(vibrio vulnificus)、副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus)的检测引物和探针。通过筛选低同源性序列，分别设计针对这六种食品微生物的特异性引物和特异性探针，采用多重PCR技术，实现对这六种食品微生物的快速有效检测。本发明提供了一种简单、样品需求量小，快速、灵敏度高、易于推广的多种食品微生物的检测方法，并且该试剂盒成本低、适用范围广。本发明还利用液相芯片技术和扫描芯片技术，建立了能特异性检测上述六种食品微生物检测方法，该检测方法能够对目标基因进行快速检测，其检测灵敏度高，特异性好。

技术领域

本发明属于食品微生物检测和分子生物学领域，具体涉及一种食品微生物大肠杆菌(Escherichia coli)、斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)、创伤弧菌(vibriovulnificus)、副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus)的检测探针、芯片、试剂盒及方法。

背景技术

微生物与人类活动密切相关，微生物技术广泛用于食品和药品生产、新型材料、能源的开发及环境治理等方面。但另一方面，微生物污染也是引发食源性疾病的主要因素之一，而食品安全是直接关系到人民群众生命、健康和社会稳定的重大公共安全问题。微生物污染存在食品生产、加工、储存、运输、销售到食用的整个过程的每个环节中。食品微生物检验是保证食品安全的技术手段，微生物指标可真实反映食品原料、生产加工过程以及加工环境是否得到有效控制，也是判定食品能否安全食用的科学依据之一。

目前食品中微生物检测主要依据GB 4789系列标准，采用平板计数的方法进行检验。对于非致病菌的检验，按照此种检验方法，耗时较长，例如:菌落总数仅培养时间就需48h，霉菌及酵母菌检验至少则需要5d。而对于致病菌的检测耗时则更长，包括预增菌、增菌、分离、生化试验、镜检以及血清学验证等一系列的检测程序，一般需要5～7d。此外，传统平板计数法对实验室条件(设备设施和环境)、对人员专业技能和人员数量要求高。繁琐的检测程序不仅占用了大量的检测资源，更重要的是冗长的检测周期既不利于生产者对食品的即时监控和在线控制，也不利于监管部门对问题食品的快速反应，尤其是在一些短保质期产品，如部分乳制品、糕点类制品和豆制品的微生物控制方面，其局限性日益显现。

焙烤食品是指以粮、油、糖、蛋、乳等为主料，添加适量辅料，并经调制、成型、焙烤工序制成的食品，常见的包括面包、饼干、糕点等。焙烤食品富含营养，微生物污染后有可能大量增殖引发疾病。焙烤食品引发的食物中毒事件的原因食物包括裱花蛋糕、夹心蛋糕、泡芙面包等，致病因子包括金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、沙门菌等。目前对焙烤食品微生物污染的专门检测试剂盒和检测方法较少，为提高焙烤食品微生物检测精准度和速度特设计本申请的。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时检测多种食品微生物的引物探针组合、试剂盒以及方法，从而解决现有技术中缺乏能够快速有效同时检测大肠杆菌(Escherichia coli)、斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)、创伤弧菌(vibrio vulnificus)、副溶血性弧菌(vibrioparahaemolyticus)，本发明采用如下技术方案：