[发明专利]高效精准替换红色毛癣菌基因的方法在审
申请号: | 202210633903.8 | 申请日: | 2022-06-06 |
公开(公告)号: | CN115651933A | 公开(公告)日: | 2023-01-31 |
发明(设计)人: | 陈柏叡;孙毅;吴小末;张金燕 | 申请(专利权)人: | 福州市皮肤病防治院 |
主分类号: | C12N15/90 | 分类号: | C12N15/90;C12N15/31 |
代理公司: | 焦作加贝专利代理事务所(普通合伙) 41182 | 代理人: | 任昕 |
地址: | 350025 福*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 高效 精准 替换 红色 毛癣菌 基因 方法 | ||
1.一种高效精准替换红色毛癣菌基因的方法,其特征在于:其包括如下步骤:
(1)、设计红色毛癣菌中EFG1基因片段的上游引物和下游引物序列,并进行扩增;
(2)、提取PAN7-1质粒的DNA后,使用引物进行扩增,得到HPH试剂;
(3)、将步骤(1)中扩增后的上游序列、扩增后的下游序列和HPH试剂通过引物进行扩增融合,得到融合的PCR产物;
(4)、将使用果胶酶制备的原生质体和融合的PCR产物进行转化融合;
(5)、提取步骤(4)中转化子的DNA后,设计引物进行扩增,并验证转化产物。
2.根据权利要求1所述的高效精准替换红色毛癣菌基因的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述上游引物的序列分别如和SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的高效精准替换红SEQ ID NO.1色毛癣菌基因的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述下游引物的序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
4.根据权利要求1所述的高效精准替换红色毛癣菌基因的方法,其特征在于:步骤(2)中,所述引物的序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。
5.根据权利要求1所述的高效精准替换红色毛癣菌基因的方法,其特征在于:步骤(3)中,所述引物的序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。
6.根据权利要求1所述的高效精准替换红色毛癣菌基因的方法,其特征在于:步骤(5)中,所述引物中Rox-2.4引物的序列如SEQ ID NO.9所示。
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