[发明专利]一种用于检测AFB1

权利要求书

1.一种用于检测AFB₁的适配体侧向流动分析试纸条，包括PVC背衬卡，样品垫，结合垫，NC膜、吸收垫，其特征在于，还包括AFB₁-apt，所述NC膜设置的检测线固定有A35-apt-链霉亲和素复合物，所述结合垫设置有cDNA荧光探针。

2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：

所述A35-apt的核苷酸序列：5'-TGCACGTGTTGTCTCTCTGTCAGACGTGCTTTTTT-Biotin-TEG-3'，如SEQ ID NO.1；

所述AFB₁-apt的核苷酸序列：5'-TGCACGTGTTGTCTCTCTGTCAGACGTGC-3'，如SEQ IDNO.2；

所述cDNA荧光探针的核苷酸序列：5'-ACAACACGTGCA-3'，如SEQ ID NO.3；

cDNA荧光探针的荧光报告分子包括6-Fam、Cy5、TMR或R6G。

3.一种试剂盒，其特征在于：包括权利要求1或2所述的用于检测AFB₁的适配体侧向流动分析试纸条。

4.一种用于检测AFB₁的适配体侧向流动分析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取链霉亲和素、A35-apt反应，获得A35-apt-链霉亲和素复合物；用A35-apt-链霉亲和素复合物在NC膜划线，为T线；

(2)用cDNA荧光探针溶液，在结合垫划线；

(3)将NC膜，结合垫，样品垫和吸收垫依次和PVC背衬卡组装，获得适配体侧向流动分析试纸条。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)链霉亲和素、A35-apt的摩尔浓度比为2：2～9；所述划线的具体步骤：使用磷酸盐缓冲液将A35-apt-链霉亲和素复合物包被到NC膜上，划线后，37℃烘干20min；所述A35-apt-链霉亲和素复合物浓度为30μM，划线时的用量为0.5μl/cm。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述划线：cDNA荧光探针溶液浓度2μM；划线时的用量为0.5μl/cm；划线后37℃烘干20min。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，还包括将步骤(3)组装好的适配体侧向流动分析试纸条进行切割，宽4mm。

8.一种利用权利要求1～3任一所述试纸条检测AFB₁的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将AFB₁-apt溶液与样品的混合液孵育，得混合液；

(2)混合液滴加到试纸条样品垫处，借助溶液流经结合垫与事先加到结合垫的cDNA荧光探针竞争，检测线捕获游离的cDNA荧光探针；

(3)通过观察检测线荧光强度对AFB₁进行检测。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述孵育的条件：25℃，时间为5min；AFB₁-apt溶液浓度为2μM，体积为2μl。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述检测的标准：

(1)检测线无荧光，表示检测结果为阴性，说明被测样品不含AFB₁；

(2)检测线显示荧光，表示检测结果为阳性，说明被测样品含有AFB₁，用荧光试纸条阅读器测定检测线上荧光强度，进行AFB₁的含量进行定量分析，所述检测线荧光强度随测试样品中AFB₁浓度增加而递增。