[发明专利]一种用于检测AFB1

说明书

本发明公开了一种用于检测AFB₁的适配体侧向流动分析试纸条及检测方法。属于生物化学、分析化学技术领域。包括AFB₁‑apt，NC膜设置的检测线固定有A35‑apt‑链霉亲和素复合物，结合垫设置有cDNA荧光探针。利用AFB₁与适配体互补链直接竞争适配体，用A35‑apt‑链霉亲和素复合物作为试纸条T线，设计了信号递增型的侧向流动分析试纸条。检测过程中，AFB₁与cDNA荧光探针之间直接竞争AFB1‑apt，剩余的cDNA荧光探针与T线处的A35‑apt‑链霉亲和素复合物互补结合，使得T线荧光信号随着AFB₁浓度的增加而增强，从而提高试纸条检测AFB₁的灵敏度。用于AFB₁的快速定量检测，具有优异的特异性、重现性和结果易读性等优点。

技术领域

本发明涉及生物化学、分析化学技术领域，更具体的说是涉及一种用于检测AFB1的适配体侧向流动分析试纸条及检测方法。

背景技术

黄曲霉毒素B₁(AFB₁)是一种已知存在于天然食物中的霉菌毒素，对人类和动物具有强烈的致癌作用。长期暴露于食物和饲料中非常低水平的AFB₁是人类和动物健康的重要考虑因素。为了确保食品安全，保护人类和动物的健康，世界上许多国家和地区已经为饲料和食品中的AFB₁设定了最大允许限量值，我国家食品安全标准规定，黄曲霉毒素_B1是大多数食品的强制检验项目之一，如谷物的限量不超过10μg/kg。

目前，检测AFB₁的分析方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)、气相色谱-质谱法(GS-MS)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等，但这些方法具有耗时长、设备昂贵，需要专业技术人员操作等缺点，无法满足批量样品的快速筛查检测。

侧向流动分析(LFA)具有简便、快速、灵敏、经济等优点，特别适合于大批量样本的检测，在临床诊断、食品安全、环境卫生等领域有着广泛的应用。

然而，对于小分子分析物AFB₁是不幸的，因为它只有一个抗体结合位点，不能同时结合两种抗体。因此，侧向流动分析法检测AFB₁通常采用竞争性反应来完成。该方法结果表现形式是阳性样品检测线无信号；而阴性样品检测线有信号，并且随着分析物含量递增而减弱；对于分析物含量接近检测限时，检测线处的信号最强，随着分析物含量递增，检测线的信号强度变化较小，灵敏度较低，且结果观察不够直观。

为此，需要进一步改进现有AFB₁的侧向流动分析检测结果的表达方式，提高灵敏度，改善结果观察的直观性。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种用于检测AFB₁的适配体侧向流动分析试纸条及检测方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于检测AFB₁的适配体侧向流动分析试纸条，包括PVC背衬卡，样品垫，结合垫，NC膜、吸收垫，还包括AFB₁-apt，NC膜设置的检测线固定有A35-apt-链霉亲和素复合物，结合垫设置有cDNA荧光探针。

优选的：A35-apt的核苷酸序列：5'-TGCACGTGTTGTCTCTCTGTCAGACGTGCTTTTTT-Biotin-TEG-3'，如SEQ ID NO.1；

AFB₁-apt的核苷酸序列：5'-TGCACGTGTTGTCTCTCTGTCAGACGTGC-3'，如SEQ IDNO.2；

cDNA荧光探针的核苷酸序列：5'-ACAACACGTGCA-3'，如SEQ ID NO.3；