[发明专利]一种δ株2019-nCoV的表面蛋白受体结合区制备方法

说明书

本发明公开了一种δ株2019‑nCoV的表面蛋白受体结合区制备方法。本发明提供了SEQ ID No.1所示多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：提高δ株2019‑nCoV的S蛋白RBD在宿主细胞中的分泌表达产量；提高δ株2019‑nCoV的S蛋白RBD在宿主细胞中的分泌表达效率；制备δ株2019‑nCoV的S蛋白RBD分泌蛋白制品；所述相关生物材料为SEQ ID No.1所示多肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒或重组载体或重组菌或转基因细胞系。本发明采用2019‑nCoV的S蛋白的天然信号肽和SEQID No.1所示人工信号肽，用于引导2019‑nCoV的RBD真核细胞分泌表达，结果显示人工信号肽H分泌表达水平显著优于天然信号肽S，更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种δ株2019-nCoV的表面蛋白受体结合区制备方法。

背景技术

2019-nCoV为正链RNA病毒，基因组大小约30kb，属于冠状病毒的β属。人体感染冠状病毒后常见症状有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等；在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡等。

2019-nCoV的表面蛋白(S蛋白)参与和宿主细胞膜受体(ACE-2)结合的功能，决定病毒的宿主范围和特异性。因此，S蛋白在疫苗开发或治疗性药物开发中是关键的靶点：1)宿主中和抗体的重要作用位点；2)疫苗设计的关键靶点。目前，表面蛋白(S)的受体结合区(RBD)被认为是诱导机体产生中和抗体的最主要的抗原靶区域，能够将机体刺激产生的中和抗体更加聚焦在针对病毒的受体结合，可以提高疫苗的免疫原性和免疫效率。

2019-nCoV作为单链RNA病毒，基因组不稳定，随着感染群体增加，进化出诸多优势毒株。2021年5月，世卫组织将最早在印度发现的2019-nCoV变异毒株B.1.617.2命名为δ株；该突变株为潜伏期短、传播速度快、病毒载量高、核酸转阴时间长、更易发展为危重症等特点。因此，开发针对δ株2019-nCoV的疫苗具有重要的经济和社会价值。

2019-nCoV的S蛋白的RBD作为关键免疫原，采用分泌表达具有显著优势：1)分泌表达上清纯化工艺简单；2)可溶性表达；3)信号肽酶精准切割，N端无冗余Met残基，产生符合预期的蛋白序列。

发明内容

本发明的目的是提供一种δ株2019-nCoV的表面蛋白(S蛋白)受体结合区(RBD)制备方法。

为解决上述问题，本发明采用人工改造信号肽(信号肽H，SEQ ID No.1)引导δ株2019-nCoV的S蛋白RBD分泌至培养上清，经过镍柱亲和层析即可获得高纯度抗原，且其分泌表达产量显著高于S蛋白天然信号肽(信号肽S)。

第一方面，本发明要求保护SEQ ID No.1所示多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：

P1、提高δ株2019-nCoV的S蛋白RBD在宿主细胞中的分泌表达产量；

P2、提高δ株2019-nCoV的S蛋白RBD在宿主细胞中的分泌表达效率；

P3、制备δ株2019-nCoV的S蛋白RBD分泌蛋白制品；

所述相关生物材料为SEQ ID No.1所示多肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒或重组载体或重组菌或转基因细胞系。

进一步地，所述宿主细胞可为真核宿主细胞。如：HEK293细胞，CHO细胞，酵母细胞和昆虫细胞等。

在本发明的具体实施方式中，所述宿主细胞具体为Expi293F细胞。

进一步地，所述编码基因可为如下任一：

(a1)SEQ ID No.2所示的DNA分子；