[发明专利]粪菌移植法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型、评价及应用

权利要求书

1.一种运用粪菌移植法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

（1）制备粪菌液：将来源于临床确诊为高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证患者的粪便制成粪菌液；

具体包括如下步骤：

A:配置0.9%生理盐水内含10%甘油、0.1%L-半胱氨酸混合溶液，作为粪便保护液，高压灭菌锅内115℃煮熟20min，粪便样本置入装有粪便保护液中，混匀；

B:将步骤A得到的混匀粪便的粪便保护液过滤，得到滤液进行离心处理，弃上清液，所得沉淀为收集到的菌体；离心条件为4000rpm 10min；

C:使用粪便保护液重悬步骤B所得沉淀菌体；

D:根据需要分装粪菌液，-80℃保存；

步骤B、C、D均在厌氧环境下完成，其中厌氧环境要求O₂浓度2%；

（2）小鼠灌服和饮水方式服用四联抗生素药物，所述的四联抗生素药物为氨苄青霉素、万古霉素、新霉素、甲硝唑；

具体包括如下步骤：

步骤1：小鼠选取阶段，选取SPF级雄性C57BL/6小鼠，鼠龄6周；

步骤2：小鼠分类阶段，将C57BL/6小鼠分类，分为健康菌液组（C组）、高血压阴虚证菌液组（TY组）、高血压非阴虚证菌液组（TNY组）；

步骤3：清除菌群阶段，步骤2所述小鼠于第1周灌胃给药四联抗生素，第2周饮水给药四联抗生素；灌胃给药量为氨苄青霉素5mg/只，万古霉素5mg/只，新霉素5mg/只，甲硝唑4mg/只，饮水给药四联抗生素量为氨苄青霉素1g/L，万古霉素0.5g/L，新霉素1g/L，甲硝唑1g/L；

步骤4：造模阶段，步骤3所述小鼠分别移植健康志愿者、高血压阴虚证患者及非阴虚患者粪菌液；移植粪菌液量为200μL/只/天，每隔天1天加强接种1次，持续5周；

（3）模型建立：步骤2中小鼠分别移植步骤1制备的粪菌液，得到高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证模型。

2.根据权利要求1所述的一种运用粪菌移植法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型的方法，其特征在于客观化评价高血压病阴虚证相关表型，所述方法还包括：通过旷场实验、易激惹评分、体温、饮水量、唾液流率、粪便含水量、皮肤含水量、体质量、24h尿量、尿胆素原和胆红素、心脏指数、摄食量、收缩压、舒张压及心率进行评价。

3.根据权利要求2所述的一种运用粪菌移植法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型的方法，其特征在于，所述的旷场试验包括小鼠的探索行为、小鼠在正中格停留时间、穿格次数、旷场区运动距离及运动速度。

4.权利要求1-3中任意一项所述的运用粪菌移植法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型的方法，其特征在于，将所述方法构建的高血压动物模型包括用于研发高血压的早期诊断试剂及方法和研发高血压的治疗药物。