[发明专利]粪菌移植法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型、评价及应用

说明书

本发明涉及一种动物模型的构建方法，具体涉及发明属于一种动物模型的构建方法，具体涉及一种运用粪菌移植法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型、评价方法及应用。本发明通过制备高血压阴虚证和/或非阴虚证患者的粪菌液、小鼠灌服和饮水方式服用四联抗生素药物后移植制备的粪菌液，得到相应的高血压阴虚证和/或非阴虚证动物模型，同时采用多种方法进行动物模型评价，确认模型建立是否成功。本发明提供一种稳定性高、易于推广、重复性好、成功率高，经济实用的高血压阴虚证和/或非阴虚证动物模型，为中医药治疗高血压研究提供基础，为实现阴虚证模型评价的标准化与规范化提供思路。

技术领域

本发明属于一种动物模型的构建方法，具体涉及一种运用粪菌移植法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型、评价及应用。

背景技术

高血压是临床常见病、多发病，是心脑血管病的发病基础。约95％以上患者， 其病因不明称为“原发性高血压”，原发性高血压又称高血压病，是以体循环动 脉血压增高为主要表现的临床综合征；由多基因遗传、环境及多种危险因素相互作用所致的全身性疾病。其中，除了高血压病本身血压增高有关症状外，长 期高血压还可以影响心、脑、肾的功能，最终可导致这些器官功能衰竭，降低 患者的生活、工作质量，严重者可危及生命。尤其是我国正步入老龄化阶段， 高血压病的发病率呈逐年上升趋势，致残率、病死率极高，对患者生命健康带 来严重威胁。临床中如何选择降压效果好、毒副反应小、改善症状明显、有靶 器官保护作用、价格合理的治疗措施，是临床医生及患者都关注的问题。

肠道菌群是一个复杂且庞大的群体，在一个健康的成年人体内，肠道菌群总重量可达约1 -2千克，其中包含的细胞数量高达1013 -1014个，约是人体细胞数目的10倍，肠道微 生物编码基因组数目约为人体编码基因数目的100倍，因此也被称为“第二基因组”。

粪菌移植”（Fecal microbiota transplantation，FMT），其定义是，将健康人粪便中的功能菌群，移植到患者胃肠道内，重建新的肠道菌群，实现肠道及肠道外疾病的治疗，粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT) 作为重建肠道菌群的有效手段。

目前，粪便移植试验的小鼠模型不仅构建繁琐、模型效果较差、难以反映真实情况；且未发现通过粪便移植方法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型相关报道。

发明内容

本发明的目的克服了现有技术的不足，提供了一种建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型方法、评价方法和应用。

本发明由如下技术方案实现的。

第一方面。

本发明提供一种运用粪菌移植法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型的方法，具体包括如下步骤：

（1）制备粪菌液：将来源于临床确诊为高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证患者的粪便制成粪菌液；

（2）小鼠灌服和饮水方式给药四联抗生素药物，所述的四联抗生素为氨苄青霉素、万古霉素、新霉素、甲硝唑；

（3）模型建立：步骤2中小鼠分别移植步骤1制备的粪菌液，得到高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证模型。

进一步的，一种运用粪菌移植法建立高血压阴虚证和/或高血压非阴虚证动物模型的方法，所述步骤(1)具体包括如下步骤：

A:配置0.9%生理盐水内含10%甘油、0.1%L-半胱氨酸混合溶液，作为粪便保护液，高压灭菌锅内115℃煮熟20 min，粪便样本置入装有粪便保护液中，混匀；

B: 将步骤A得到的混匀粪便的粪便保护液过滤，得到滤液进行离心处理，弃上清液，所得沉淀为收集到的菌体；

C:使用粪便保护液重悬步骤B所得沉淀菌体；