[发明专利]一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法

权利要求书

1.一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法，其特征在于，包括：

样品预处理步骤，包括将待测样品与溶剂混合，提取处理，然后浓缩至干，然后加入含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液以及吡啶，衍生反应后，固液分离，取第一上清液，加入水，再次混匀，固液分离，获得第二上清液；

液相色谱-串联质谱检测步骤，包括采用液相色谱-串联质谱检测所述第二上清液，获得检测结果；

计算步骤，根据所述检测结果，计算得到待测样品中α-酮戊二酸、D-2-羟基戊二酸、L-2-羟基戊二酸的含量；

所述液相色谱-串联质谱检测步骤中，液相色谱的检测条件中，色谱柱为C18色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A、B选自如下组合中的任意一种：

1）流动相A为含有乙酸铵的水溶液，流动相B为含有乙酸铵的甲醇溶液；

2）流动相A为含有甲酸铵的水溶液，流动相B为含有甲酸铵的甲醇溶液；

所述液相色谱的洗脱程序如下：

。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有乙酸铵的水溶液中，乙酸铵的浓度为5~10mmol/L；

所述含有乙酸铵的甲醇溶液中，乙酸铵的浓度为5~10mmol/L；

所述含有甲酸铵的水溶液中，甲酸铵的浓度为5~10mmol/L；

所述含有甲酸铵的甲醇溶液中，甲酸铵的浓度为5~10mmol/L。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱-串联质谱检测步骤中，所述液相色谱为高效液相色谱。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述C18色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEHC18色谱柱，规格为100mm*2.1mm，1.7μm粒径。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的检测条件中，色谱柱温度为30~50℃。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的检测条件中，色谱柱温度为38~42℃。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的检测条件中，色谱柱温度为40℃。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱-串联质谱检测步骤中，还包括如下A）至J）中的至少一项：

A）所述串联质谱为三重四级杆质谱；

B）所述串联质谱的检测条件中，离子源为电喷雾离子源；

C）所述串联质谱的检测条件中，电离模式为负离子模式；

D）所述串联质谱的检测条件中，扫描方式为多反应监测或选择反应监测；

E）所述串联质谱的检测条件中，雾化帘气压为30~40psi；

F）所述串联质谱的检测条件中，离子化电压为-3500~-4500V；

G）所述串联质谱的检测条件中，雾化温度为400~600℃；

H）所述串联质谱的检测条件中，辅助气压为40~60psi；

I）所述串联质谱的检测条件中，引入电压为-5~-10V；

J）所述串联质谱的检测条件中，碰撞池出口电压为-5~-10V。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱检测步骤中，所述串联质谱的检测条件中，检测参数如下：

。