[发明专利]一种基于CRISPR-Cas9技术特异敲除人兔VEGFA的新型载基因药物

权利要求书

1.一种基于CRISPR-Cas9技术特异敲除人兔VEGFA的载基因药物，其特征在于，所述载基因药物包括药物载体和重组质粒，所述药物载体为硫辛酸接枝的聚乙烯亚胺与聚乙二醇的高分子聚合物，所述药物载体的制备方法为：以聚乙烯亚胺作为主体，利用亲水性材料聚乙二醇对聚乙烯亚胺进行修饰，然后接枝硫辛酸，制备出高分子聚合物基因载体P[TA-(PEG+PEI)]，其中，聚乙二醇、聚乙烯亚胺和硫辛酸的摩尔比为1:1:2；

所述重组质粒同时表达靶向敲除人VEGFA基因和兔VEGFA基因的sgRNA和Cas9序列，所述sgRNA的序列为如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示。

2.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR-Cas9技术特异敲除人兔VEGFA的载基因药物，其特征在于，所述重组质粒中还含有表达eGFP的序列。

3.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR-Cas9技术特异敲除人兔VEGFA的载基因药物，其特征在于，所述重组质粒以YSY为出发质粒。

4.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR-Cas9技术特异敲除人兔VEGFA的载基因药物，其特征在于，所述载基因药物中，药物载体的浓度为5μg/μl，重组质粒浓度为15ng/μl，药物载体和重组质粒的体积比为3:1。

5.根据权利要求4所述的一种基于CRISPR-Cas9技术特异敲除人兔VEGFA的载基因药物，其特征在于，载基因药物的制备方法为：将药物载体和重组质粒按照上述配比，在室温下共孵育30分钟，即可配置成载基因药物。