[发明专利]一种免疫细胞功能图谱体系及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种免疫细胞功能图谱体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)设置疾病组与对照组，并分别取疾病组和对照组相同种类的标本待用；

(2)对疾病组与对照组标本进行单细胞悬液分离，得单个核细胞；

(3)取步骤(2)的单个核细胞进行单细胞分析，得到单细胞分析结果；

(4)取步骤(2)的单个核细胞进行流式免疫功能评估，得到流式细胞图谱；

(5)对步骤(3)得到的单细胞分析结果和步骤(4)得到的流式细胞图谱进行分析，构建免疫细胞功能图谱体系。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述步骤(1)中的标本包括外周血、关节软骨、滑膜、滑液、皮肤组织或肠粘膜组织。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中的单细胞分析具体包括以下步骤：

(1)构建单细胞cDNA文库；

(2)利用Illumina平台对单细胞cDNA文库进行测序；

(3)对测序数据进行拼接和质控，转换为fastq文件；

(4)依据10xGenomics官方分析pipeline对fastq文件进行比对、整合，获得表达矩阵；

(5)基于R环境利用Seurat R包进行数据二次质控，进行降维聚类分析、差异表达分析和通路富集分析；

(6)基于R环境利用monocle R包进行细胞发育轨迹分析。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)的单细胞分析结果包括免疫细胞类型聚类图、免疫细胞差异基因表达图、免疫细胞差异富集通路图、免疫细胞发育轨迹图和疾病特异的标志物。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(4)的流式免疫功能评估包括根据步骤(3)得到的疾病特异的标志物设计流式抗体进行流式免疫功能评估。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(4)的流式免疫功能评估包括对T细胞、NK细胞进行检测。

7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述免疫相关疾病包括但不限于强直性脊柱炎、骨关节炎、痛风、骨质疏松、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征、系统性硬化。

8.一种免疫细胞功能图谱体系，其特征在于，由权利要求1～7任一项所述的构建方法制备得到。

9.根据权利要求8所述的免疫细胞功能图谱体系在如下任一项中的应用：

(1)制备用于鉴定免疫相关疾病免疫细胞类型及其功能改变的产品中的应用；

(2)制备用于诊断免疫相关疾病的试剂或试剂盒中的应用；

(3)制备用于监测免疫相关疾病的活动度和治疗效果的产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述免疫相关疾病包括但不限于强直性脊柱炎、骨关节炎、痛风、骨质疏松、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征、系统性硬化。