[发明专利]一种微生物菌剂

权利要求书

1.一种微生物菌剂，其特征在于：具有活性成分苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2，苏云金杆菌FF05-2的DNA基因序列表如SEQ ID NO.1所述；肠杆菌属05-2的DNA基因序列表如SEQ ID NO.2所述；所述苏云金杆菌FF05-2的分类名为Bacillus thuringiensis，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2021年05月17日，保藏编号为CGMCC NO.22542；所述肠杆菌属05-2的分类名为Enterbacter soli，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2021年05月17日，保藏编号为CGMCCNO.22541。

2.根据权利要求1所述的微生物菌剂在红薯减毒苗中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，具体步骤如下：

步骤一、种薯选择和处理：选取无病害虫斑的红薯为种薯，装入容器内，以微生物菌剂发酵液浸没浸泡一设定时间后，取出并将种薯至于沙中直至发芽；

步骤二、减毒苗：红薯苗长到8～9片叶子时，切取0.3～0.5mm的茎尖组织进行组织培养，获得携带苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2的减毒红薯苗；

步骤三、减毒苗的病毒检测：采用RT-PCR检测红薯中褪绿矮化病毒和羽状斑驳病毒，减毒苗中无两类病毒的检出；

步骤四、减毒红薯苗的田间栽播：减毒红薯苗长大后进行移栽，在大田中生长到霜降前进行红薯块根的收获。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述步骤一中，微生物菌剂发酵液用自来水稀释10倍，种薯浸没入微生物菌剂的稀释液中，浸泡30 min后取出；所述步骤二中，减毒红薯苗中苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2的克隆数分别为1×10⁷ cfu/g红薯苗。

5.根据权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于：所述苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2用Ashby液体培养基培养，苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2的液体培养物按cfu比1:2组成。

6.根据权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于：每1 ml中至少含有1×10⁸ cfu苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2。

7.根据权利要求1所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：

步骤一、采用Ashby固体培养基将苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2活化，并采用Ashby液体培养基进行培养，得到苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2的一级培养菌；

步骤二、将步骤一中培养得到苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2的一级培养菌按cfu比1:2进行混合，按照10%的接种量把混合菌液放入发酵液体培养基进行发酵培养，在37℃条件下培养10～12 h，得到发酵的微生物菌剂。

8.根据权利要求7所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤一中，取出-20℃条件下保存的苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2，分别用接种环蘸取少许菌液于Ashby固体培养基上划线，于37℃条件下培养10～12 h；用接种环挑取该固体培养基上的单菌落，接种于Ashby液体培养基的100 mL三角瓶中，于37℃条件下培养8~10 h得到活化的菌株；此时，每毫升Ashby液体培养基中至少含有1×10⁸ cfu苏云金杆菌FF05-2和肠杆菌属05-2。

9.根据权利要求7所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤二中，发酵液体培养基每升的组成及含量为： MgSO₄·7H₂O 0.2g/L；NaCl 0.2g/L；甘露醇 10g/L；K₂HPO ₄ 0.2g/L；CaCO₃ 2.0g/L；蛭石 2.0g/L；pH值6.4，121℃灭菌15分钟。