[发明专利]一种人胚胎干细胞与前列腺癌细胞共培养制备抗前列腺癌药物的方法

权利要求书

1.一种人胚胎干细胞与前列腺癌细胞共培养制备抗前列腺癌药物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)预铺Matrigel基质胶制备人胚胎干细胞专用培养板；

(2)人胚胎干细胞进行消化传代；

(3)使用步骤(1)预铺的Matrigel基质胶制备人胚胎干细胞专用培养板进行人胚胎干细胞接种；

(4)取对数生长期的前列腺癌细胞，吸弃培养基后加入DPBS缓冲液清洗细胞，用EDTA于32-42℃消化2-6min，吸去上清液，用人胚胎干细胞完全培养基将前列腺癌细胞重悬为单个细胞悬液，将前列腺癌细胞数按培养体系中人胚胎干细胞的1：1-1：5比例，加入到人胚胎干细胞培养体系中，将两种细胞在32-42℃的CO₂细胞培养箱中进行共培养；

(5)共培养24-96h后收取共培养液；

所述人胚胎干细胞为已建立的干细胞系。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述培养基包括人多潜能干细胞培养基、mTeSR^TM1培养基、Essential 8^TM培养基、DMEM/F12培养基的一种或两种。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述预铺Matrigel基质胶制备人胚胎干细胞专用培养板的方法为将Matrigel稀释后进行预铺细胞培养孔板，在37℃恒温CO₂细胞培养箱中放置4-12小时；所述Matrigel稀释为Matrigel用DPBS稀释，其中Matrigel：DPBS＝1：30-1：50。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：人胚胎干细胞进行消化传代的方法为选取传代培养中的人胚胎干细胞，吸弃培养基后加入DPBS缓冲液清洗细胞，加入细胞解离试剂干细胞消化液，放入培养箱中孵育，肉眼观察到细胞集落变得不透明且发白，吸弃干细胞消化液，加入干细胞培养基，将细胞刮轻刮细胞成几十个细胞团块。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：人胚胎干细胞接种的方法为取步骤(1)的孔板，吸弃配制Matrigel基质胶的基础工作液，加入DPBS缓冲液清洗制备好的机制胶，加入干细胞培养基，然后均匀接种步骤(2)的细胞团块悬液于制备好的Matrigel基质胶孔板中，24h换液。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述共培养的方法为待人胚胎干细胞状态成熟，取对数生长期的肿瘤细胞吸弃培养基后加入DPBS缓冲液清洗细胞两遍，用EDTA消化37℃消化，吸去上清液，用干细胞培养基将癌细胞重悬为单个细胞悬液，将癌细胞数加入到人胚胎干细胞培养体系中，将两种细胞在37℃恒温CO₂细胞培养箱中进行共培养。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：人胚胎干细胞状态成熟为胚胎干细胞细胞汇合度达到50％-60％时、克隆边缘平滑且无分化细胞、细胞与细胞之间分散、未发生融合的情况。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：收取共培养液为共培养24h-96h后用离心管收取共培养上清液，离心，再用微孔滤膜过滤，收集上清液。

9.如权利要求1-8任一项方法所制备的共培养液在制备抗前列腺癌药物中的应用。