[发明专利]一种人胚胎干细胞与前列腺癌细胞共培养制备抗前列腺癌药物的方法

说明书

本发明提供一种人胚胎干细胞与前列腺癌细胞共培养制备抗前列腺癌药物的方法。人胚胎干细胞能在体外培养、具有发育全能性的干细胞，具有高度的自我更新、无限增殖以及多向分化的能力。发明人意外发现，将人胚胎干细胞和前列腺癌细胞进行直接接触共培养，人胚胎干细胞微环境受到其他肿瘤细胞的刺激，会产生抑癌生物学效应，而产生“抑肿瘤”分子，因此可以提取上清液运用到前列腺癌的治疗。本发明的共培养上清液在抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭方面表现出显著的治疗效果；更重要的是，共培养上清液在体内抑制肿瘤的生长方面也表现出明显的优势，具有制备成抗前列腺癌药物的潜力。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种人胚胎干细胞与前列腺癌细胞共培养制备抗前列腺癌药物的方法。

背景技术

前列腺癌(Prostate cancer，PCa) 是一种好发于老年男性的恶性肿瘤，其发病率随年龄增加而增长。前列腺癌在全世界范围内都具有较高的发病率。每年全球有90多万新发病例，其中26万多病例因前列腺癌的恶化而死亡。欧美国家前列腺癌的发病率明显高于亚非地区。在美国，前列腺癌占美国男性肿瘤发病率的第一位。在我国，前列腺癌的发病率较以往增长了近70％。根据《临床肿瘤学杂志》 2013年第04期关于中国前列腺癌发病现状和流行趋势分析的报道，我国前列腺癌的发病率呈现明显的持续增长趋势，前列腺癌正成为严重影响我国男性健康的泌尿系统恶性肿瘤。随着我国社会老龄化现象日趋严重，我国前列腺癌的发病率可能会进入高峰期。前列腺癌的临床表现主要为排尿困难，呈渐进性地出现尿频、尿急、血尿等症状并伴随排尿时的疼痛感或灼烧感及背下部、大腿上部或骨盆处的连续疼痛。前列腺癌肿瘤初期无任何临床表现，常以出现转移症状为最早的就诊原因。由于前列腺癌潜伏期较长，因而很难察觉，发现时一般已经发展为晚期。

前列腺癌的生长和转移密切依赖于雄激素(如双氢睾酮)。雄激素的分泌约90％来自于睾丸。雄激素被分泌后进入细胞可以与雄激素受体结合。雄激素受体是一种重要的核转录因子，调控众多的基因表达和前列腺癌细胞增殖。当雄激素与雄激素受体结合后，雄激素受体进入细胞核启动基因表达，从而促进前列腺癌生长和转移。因此，去雄激素治疗(包括切除睾丸和药物抑制雄激素水平)对于大多数前列腺癌有明显疗效。但去雄激素治疗对肿瘤的控制一般仅能维持1-4年，几乎所有前列腺癌患者最终均转为雄激素非依赖性前列腺癌，进而发展为去势抵抗性前列腺癌。此时，去雄激素治疗也就失去了效果。去势抵抗性前列腺癌是导致前列腺癌病人死亡的重要原因。去势抵抗性前列腺癌的发生机制有很多种，包括雄激素受体突变、雄激素受体表达消失以及在低雄激素环境下雄激素不敏感的细胞群扩增等。虽然去雄激素治疗没有效果，但是在大多数去势抵抗性前列腺癌中雄激素受体也同样扮演着重要的角色，所以雄激素受体是目前治疗普通前列腺癌和去势抵抗性前列腺癌的重要靶点。

当今全球医疗界尚没有一种药物能单独治愈前列腺癌。前列腺癌的主要治疗手段包括手术、放疗、化疗及生物治疗，不仅患者要经历九死一生之痛，家庭经济压力巨大，负债累累，人们最不能接受的是患病亲人承受了极大痛苦后最终还是要经历生死离别之苦。美国食品和药物管理局(FDA)最新批准的治疗去势抵抗性前列腺癌的药物包括Abiraterone和Enzalutamide，前者是抑制雄激素的合成，后者是雄激素受体的拮抗剂，这两种药物都是针对雄激素受体信号通路，在去势抵抗性前列腺癌的治疗方面取得显著疗效，但是经过内分泌治疗及靶向雄激素受体药物治疗后，病人依然会产生药物抵抗，治疗效果十分有限，且费用昂贵。此外，放化疗所引起的副作用也是临床治疗的瓶颈。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，本发明提供一种人胚胎干细胞与前列腺癌细胞共培养制备抗前列腺癌药物的方法。发明人意外发现，将人胚胎干细胞和前列腺癌细胞进行直接接触共培养，人胚胎干细胞微环境受到前列腺癌细胞的刺激，会产生抑癌生物学效应，而产生“抑前列腺癌”分子，再提取上清液运用到肿瘤的治疗中。本发明在共培养过程中使用专用的胚胎干细胞培养基可以尽可能的保持人胚胎干细胞的特性，利用合适状态下的胚胎干细胞及合适的胚胎干细胞和前列腺癌细胞比例进行共培养，共培养体系中两种细胞的比例不合适和加入前列腺癌细胞的时间点不合适，都不能使人胚胎干细胞产生强烈的抑制肿瘤生长的生物学效应。