[发明专利]用于检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的引物探针组合及检测方法

说明书

本发明中公开了用于检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的引物探针组合，包括正反向引物、香杏丽蘑探针、双孢蘑菇探针和质控探针；所述正反向引物的序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示；所述香杏丽蘑探针、双孢蘑菇探针和质控探针的序列依次如SEQIDNo.3‑SEQIDNo.5所示。本发明同时公开了利用该引物探针组合对香杏丽蘑和双孢蘑菇进行检测的方法。本发明中的引物探针组合的特异性强、灵敏度高，实现香杏丽蘑和双孢蘑菇的定性、定量检测，显著提高对香杏丽蘑和双孢蘑菇的检测准确度；还可以对香杏丽蘑、双孢蘑菇及质控进行同管的检测，有效节省检测工序和时间，显著降低检测成本。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，尤其涉及用于检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的引物探针组合及检测方法。

背景技术

双孢蘑菇又名白蘑菇、蘑菇、口蘑、洋蘑菇等。双孢蘑菇子实体中等大，菌盖宽5-12厘米，初半球形，后平展，白色，光滑，略干渐变黄色，边缘初期内卷。菌肉白色，厚，伤后略变淡红色，具蘑菇特有的气味。菌褶初粉红色，后变褐色至黑褐色，密，窄，离生，不等长，菌柄长4.5-9厘米，粗1.5-3.5厘米，白色，光滑，具丝光，近圆柱形，内部松软或中实，菌环单层，白色，膜质，生菌柄中部，易脱落。双孢蘑菇味道鲜美，是一种栽培规模大、栽培范围广的食用菌。其蛋白质含量高达42％(干重)，氨基酸的种类丰富，核苷酸和维生素也很丰富。双孢蘑菇也可药用。其中含多量酪氨酸酶，对降低血压有效果。还可以制成肺炎辅助治疗剂。有的国家还发现含有抗癌物质和抗细菌的广谱抗菌素。由于深层培养的研究成功，人们还可利用蘑菇菌丝体生产蛋白质、草酸和菌糖等物质。

香杏丽蘑又称虎皮香杏、黄皮口蘑、香杏蘑。子实体一般中等大。菌盖半球形至平展，光滑，不粘，带白色或淡土黄色至淡土红色，边缘内卷。菌肉白色，肥厚。菌褶白色，或稍带黄色，稠密，窄，弯生，不等长。菌柄白色，或稍带黄色，具条纹，内实。夏秋季在草原上群生、丛生或形成蘑菇圈。此种蘑菇菌肉肥厚、具香味、味道鲜美，其商品名有香杏、香杏片等。香杏丽蘑的营养价值十分丰富，含有较多的蛋白质，碳水化合物，维生素等，还有微量元素和矿物质，多吃可增人体免疫力。香杏丽蘑中含有丰富的单糖、双糖和多糖。

但是由于人为因素和气候因素的影响，使得香杏丽蘑种群数量减少，香杏丽蘑的质量和产量每况愈下，难以满足商品化、市场化的要求，导致香杏丽蘑价格上涨。由于其价格的昂贵和特有珍稀价值高，市场上常出现冒充伪劣产品和其他种类野生菌混淆的现象。而商家经常以一些来源广泛、容易获取的蘑菇充当香杏丽蘑进行销售。

我国对于食用菌真伪鉴别技术方面的研究起步晚，这一领域的研究还处于初步阶段。因此需要更为准确的检测手段来对香杏丽蘑和双孢蘑菇进行检测。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中存在的难以对香杏丽蘑和双孢蘑菇的真实性进行鉴别的问题，提供用于检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的引物探针组合及检测方法，可以同管检测香杏丽蘑和双孢蘑菇，对两者进行准确的定性和定量检测。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：用于检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的引物探针组合，包括正反向引物、香杏丽蘑探针、双孢蘑菇探针和质控探针；所述正反向引物的序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；所述香杏丽蘑探针、双孢蘑菇探针和质控探针的序列依次如SEQ ID No.3-SEQ ID No.5所示。

优选地，所述香杏丽蘑探针、双孢蘑菇探针和质控探针的5'端修饰有报告基团，3'端修饰有淬灭基团。

优选地，所述报告基团为FAM、HEX、ROX或CY5中的一种；所述淬灭基团为TAMRA、MGB、BHQ1或BHQ2中的一种。

本发明同时提供一种检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的方法，以待测蘑菇样品DNA为模板，使用上述引物探针组合，进行Real-timePCR扩增，根据扩增曲线对待测蘑菇样品中香杏丽蘑和双孢蘑菇的DNA含量进行定性定量检测。