[发明专利]一种类器官培养用组织保存液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种类器官培养用组织保存液，保存液的成分包括DMEM/F12培养基、青霉素‑链霉素、Y27632、HEPES和基于功能核酸的HGF模拟物。本发明采用上述的一种类器官培养用组织保存液及其制备方法，有效的刺激细胞生存、增殖，从而有助于保持其细胞活性，并且，有利于离体组织保存及后续类器官构建。

技术领域

本发明涉及离体组织保存及运输技术领域，尤其是涉及一种类器官培养用组织保存液及其制备方法。

背景技术

类器官(Organoid)是一种利用成体干细胞，在体外培养出的3D细胞培养物，与对应的人体器官具有高度相似的组织学特征，能重现器官的部分生理功能。利用患者离体肿瘤组织构建类器官，能模拟肿瘤组织的发生过程及生理病理状态，因而在基础研究以及临床诊疗方面具有广阔的应用前景。

患者离体组织的活性是后续能否培养出类器官的关键。现有的组织保存方法主要有(1)超低温冻存后运输：将组织置于液氮或干冰中。(2)活细胞运输保存：将活细胞置于培养液中，于0-10℃低温保存运输。

然而，超低温冻存后运输存在成本过高，冻存-复苏过程中对细胞造成损伤等问题，不利于组织活性的保持及后续类器官的构建。而目前的活细胞运输保存方法都只适合短时间保持活性，不适用于长时间远距离运输，且其对组织活性维持能力有限，限制了类器官构建的成功率。

发明内容

本发明的目的是提供一种类器官培养用组织保存液及其制备方法，有效的刺激细胞生存、增殖，从而有助于保持其细胞活性，并且，有利于离体组织保存及后续类器官构建。

为实现上述目的，本发明提供了一种类器官培养用组织保存液，保存液的成分包括DMEM/F12培养基、青霉素-链霉素、Y27632、HEPES和基于功能核酸的HGF模拟物。

优选的，青霉素-链霉素的质量浓度为0.9-1.2％，Y27632的摩尔浓度为8-12μM，HEPES的摩尔浓度为9-13mM，HGF模拟物的摩尔浓度为0.9-1.3μM。

优选的，青霉素-链霉素的质量浓度为1％，Y27632的摩尔浓度为10μM，HEPES的摩尔浓度为10mM，HGF模拟物的摩尔浓度为1μM。

优选的，基于功能核酸的HGF模拟物包括功能核酸Ap-1、Ap-2，Ap-1为如SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列，Ap-2为如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

一种类器官培养用组织保存液的制备方法，步骤如下：

S1、按照浓度要求分别配制DMEM/F12培养基、Y-27632、HEPES、青霉素-链霉素、HGF模拟物溶液；

S2、于20mL DMEM/F12培养基中依次加入10μM Y-27632、10mM HEPES、1％青霉素-链霉素，配置成保存液A；

S3、于保存液A中加入1μM HGF模拟物，即得。

优选的，基于功能核酸的HGF模拟物制备方法如下：将功能核酸Ap-1和Ap-2的干粉分别溶于纯水配成100μM，各自取母液12μL并添加18μL缓冲液充分混匀后，配成40μMAp-1和Ap-2溶液；

将配成的溶液置于金属浴95℃加热5min，迅速放置冰上半小时，然后Ap-1和Ap-2以1:1混合，室温震荡15min，得60μL 20μM基于功能核酸的HGF模拟物。

因此，本发明采用上述一种类器官培养用组织保存液及其制备方法，有利于离体组织保存及后续类器官构建。

本发明中利用功能核酸模拟HGF的活性，将其添加于保存离体组织的保存液中，利用HGF可诱导细胞生存、增殖的能力，提高保存于其中的组织的细胞活性，有利于长时间保存及后续类器官的构建。