[发明专利]高表达FRα的重组载体、重组细胞及其构建方法和用途

权利要求书

1.一种包含叶酸受体α的编码基因的重组病毒载体，其中，

所述叶酸受体α的编码基因包含如下(i)或(ii)所示的核苷酸序列：

(i)如SEQ ID NO.1所示的序列；

(ii)与SEQ ID NO.1所示的序列具有80％以上同源性的核苷酸序列；

所述病毒载体选自腺病毒载体、慢病毒载体或逆转录病毒载体；

优选地，所述重组病毒载体为重组慢病毒载体，所述重组慢病毒载体包含如下(iii)或(iv)所示的核苷酸序列：

(iii)如SEQ ID NO.2所示的序列；

(iv)与SEQ ID NO.2所示的序列具有80％以上同源性的核苷酸序列。

2.一种包含叶酸受体α的编码基因的重组病毒颗粒，其中，所述重组病毒颗粒由如权利要求1所述的重组病毒载体经过病毒包装后得到。

3.一种表达叶酸受体α的重组细胞，其中，所述重组细胞包含如权利要求2所述的重组病毒颗粒；优选地，所述重组细胞来源于如下任一种细胞系：MDA-MB-231、HEC1B、PANC-1、TK10、A549。

4.一种表达叶酸受体α的重组细胞的构建方法，其中，所述构建方法包括如下步骤：

病毒感染步骤：将如权利要求2所述的重组病毒颗粒与癌细胞、细胞培养基和聚凝胺混合，进行共孵育；

筛选步骤：利用荧光筛选或抗生素筛选阳性克隆细胞。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其中，在所述病毒感染步骤中，所述病毒感染的MOI值为20～50。

6.根据权利要求4或5所述的构建方法，其中，在所述病毒感染步骤中，所述癌细胞选自如下任一种细胞：MDA-MB-231、HEC1B、PANC-1、TK10、A549。

7.根据权利要求4～6中任一项所述的构建方法，其中，在所述病毒感染步骤中，所述聚凝胺的工作浓度为5～10μg/mL；所述细胞培养基为含有1％～7％(v/v)胎牛血清的IMDM培养基；

可选的，所述聚凝胺的工作浓度为5μg/mL、6μg/mL、7μg/mL、8μg/mL、9μg/mL或10μg/mL；

可选的，所述细胞培养基中胎牛血清的含量为1％(v/v)、2％(v/v)、3％(v/v)、4％(v/v)、5％(v/v)、6％(v/v)或7％(v/v)。

8.根据权利要求4～7中任一项所述的构建方法，其中，在所述筛选步骤中，所述抗生素为嘌呤霉素；

可选的，所述嘌呤霉素的工作浓度为1～20μg/mL；

可选的，所述嘌呤霉素的工作浓度为1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL、5μg/mL、6μg/mL、7μg/mL、8μg/mL、9μg/mL、10μg/mL、11μg/mL、12μg/mL、13μg/mL、14μg/mL、15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL或20μg/mL。

9.根据权利要求3所述的表达叶酸受体α的重组细胞，和/或根据权利要求4～8中任一项所述的方法构建的重组细胞在如下(a)～(c)至少一种中的用途：

(a)靶向叶酸受体α的药物的筛选；

(b)靶向叶酸受体α的药物的药效评价；

(c)作为靶向叶酸受体α的药物筛选或药效评价的细胞模型；

优选地，所述靶向叶酸受体α的药物为抗肿瘤药物，更优选抗乳腺癌药物。

10.一种靶向叶酸受体α的药物的筛选方法，其中，所述方法包括将所述靶向叶酸受体α的药物与根据权利要求3所述的表达叶酸受体α的重组细胞，和/或根据权利要求4～8中任一项所述的方法构建的重组细胞共孵育的步骤。