[发明专利]高表达FRα的重组载体、重组细胞及其构建方法和用途

说明书

本发明涉及生物医药领域，具体而言，本发明涉及一种包含FRα编码基因的重组病毒载体、包含FRα编码基因的重组病毒颗粒、高表达FRα的重组细胞及其构建方法和用途。本发明通过选择特定的表达FRα的基因序列，构建含有FRα编码基因的重组病毒载体及重组病毒颗粒，然后将其稳转到MDA‑MB‑231细胞株中，通过在转染过程中降低培养基中的血清浓度，添加polybrene，以及调整MOI值提高病毒转染效率，最终获得高表达FRα的细胞模型，可用于以FRα为靶点的抗肿瘤药物的筛选评价。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种高表达FRα的重组载体、重组细胞及其构建方法和用途。

背景技术

叶酸受体α(FRα)由FOLR1基因编码，是分子量为38-40kDa的细胞表面糖蛋白，最初发现是作为叶酸结合蛋白，能在牛奶中和叶酸结合，1991年作为肿瘤相关抗原被克隆。FRα是高亲和力FRs家族的一个成员，FRs家族还包括FRβ、FRγ和FRδ，它们分别由FOLR2、FOLR3和FOLR4基因编码。

FRα对还原叶酸(如5-甲基四氢叶酸和四氢叶酸)和叶酸有很高的亲和力，这些叶酸与FRα的结合促进了细胞膜上受体-配体复合物的聚集，然后经过胞吞作用内化、与溶酶体融合并酸化，最终释放出叶酸，参与之后的碳转移反应。FRα现已被证实在正常细胞中表达受限，而在绝大多数的卵巢癌以及在很多子宫癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肾癌、肺癌和乳腺癌中过度表达，FRα参与肿瘤的浸润、转移、进展，成为肿瘤治疗有吸引力的靶点。因此，目前FRα相关的靶向药物也在临床中有着广泛的应用，在临床诊断方面的应用有靶向FRα的叶酸基共轭放射性核素造影剂以及叶酸-FITC偶联探针进行荧光成像等；在治疗方面的应用更是百花齐放，从目前在研的产品药物类型去看，FRα在CAR-T、PROTAC、抗体、ADC、PDC药物等方面均有着应用。

发明内容

发明要解决的问题

目前，FRα缺乏体外高表达媒介。为此，本发明通过选择特定的表达FRα的FOLR1基因，构建含有FOLR1基因的报告系统载体，然后将其稳转到MDA-MB-231细胞株中，获得高表达FRα的抗肿瘤药物筛选细胞模型，可用于以FRα为靶点的抗肿瘤药物的靶向药效评价。

用于解决问题的方案

[1]、一种包含叶酸受体α的编码基因的重组病毒载体，其中，

所述叶酸受体α的编码基因包含如下(i)或(ii)所示的核苷酸序列：

(i)如SEQ ID NO.1所示的序列；

(ii)与SEQ ID NO.1所示的序列具有80％以上同源性的核苷酸序列；

所述病毒载体选自腺病毒载体、慢病毒载体或逆转录病毒载体；

优选地，所述重组病毒载体为重组慢病毒载体，所述重组慢病毒载体包含如下(iii)或(iv)所示的核苷酸序列：

(iii)如SEQ ID NO.2所示的序列；

(iv)与SEQ ID NO.2所示的序列具有80％以上同源性的核苷酸序列。

[2]、一种包含叶酸受体α的编码基因的重组病毒颗粒，其中，所述重组病毒颗粒由如[1]所述的重组病毒载体经过病毒包装后得到。

[3]、一种表达叶酸受体α的重组细胞，其中，所述重组细胞包含如[2]所述的重组病毒颗粒；优选地，所述重组细胞来源于如下任一种细胞系：MDA-MB-231、HEC1B、PANC-1、TK10、A549。

[4]、一种表达叶酸受体α的重组细胞的构建方法，其中，所述构建方法包括如下步骤：

病毒感染步骤：将如[2]所述的重组病毒颗粒与癌细胞、细胞培养基和聚凝胺混合，进行共孵育；