[发明专利]一种以小花为外植体建立姜荷花再生体系的方法

说明书

本发明公开了一种以小花为外植体建立姜荷花再生体系的方法，包括以下步骤：以姜荷花小花为外植体，接种到不定芽诱导培养基中，培养直至产生不定芽，不定芽诱导培养基是在MS培养基中添加蔗糖、卡拉胶、以及植物生长调节剂TDZ；然后将诱导的不定芽转至增殖培养基中进行培养，增殖培养基是在MS培养基中添加蔗糖、卡拉胶以及植物生长调节剂TDZ和NAA；培养至增殖后，将姜荷花苗在水中培养炼苗后直接进行移栽，然后按常规苗进行水肥管理。本发明提供了适合姜荷花小花建立再生的培养条件，建立姜荷花小花再生不定芽体系和增殖体系，为姜荷花组织培养快速繁殖和育种研究提供了技术支持。

技术领域

本发明属于组织培养繁殖领域，具体其涉及一种以小花为外植体建立姜荷花再生体系的方法。

背景技术

姜荷花(Curcuma alismatifolia)适用于盆栽、切花以及园林应用等，近年来市场在不断发展扩大。姜荷花为国外引进品种，在国内发展过程中的制约因素之一是种苗。姜荷花是球根花卉，单靠传统的分球繁殖，繁殖系数低，完全不能满足市场发展的需要。因此通过建立姜荷花再生体系的方法，为姜荷花组织培养快速繁殖提供新途径，对姜荷花产业的发展具有重要意义。目前已报道的研究中，尚未见以姜荷花小花为外植体建立再生体系的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以小花为外植体建立姜荷花再生体系的方法，为姜荷花种苗繁育以及未来转基因体系的建立提供技术支持。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种以小花为外植体建立姜荷花再生体系的方法如下：

1)在姜荷花小花即将开放或开放1朵时将花枝采下，取上部花序部分，用75％酒精消毒5min后，加2％次氯酸钠和0.1‰-0.2‰的吐温消毒7-8min，无菌水冲洗1次后，加2％次氯酸钠消毒7-8min，无菌水冲洗3-4次后置于灭菌纸上备用；

2)将清理干净的姜荷花在无菌纸上切去苞片，将每片苞片内小花成簇切下，以小花为外植体，接种到不定芽诱导培养基中，置于25℃±1℃，光照14±0.5h/d，光强3000-5000LX条件下进行培养，根据品种材料不同，在30-40d即有不定芽产生；

所述不定芽诱导培养基由基础培养基和植物生长调节剂组成，制备方法为：在MS培养基中添加30g/L蔗糖和6.5g/L卡拉胶，得到基础培养基，然后添加0.5mg/L的TDZ，最后将培养基的酸碱度调节至5.8；

3)将步骤2)诱导的不定芽转至增殖培养基中，置于25℃±1℃，光照14±0.5h/d，光强3000-5000LX条件下进行培养；

所述增殖培养基由基础培养基和植物生长调节剂组成，制备方法为：在MS培养基中添加30g/L蔗糖和6.5g/L卡拉胶，得到基础培养基，然后添加0.2mg/L TDZ和NAA 0.2mg/L，培养基的酸碱度调节至5.8；

4)增殖后不需要另外进行生根培养，将姜荷花苗开盖洗净培养基，在水中培养炼苗3-5d，炼苗后直接进行移栽，然后按常规苗进行水肥管理。

本发明提供了适合姜荷花小花建立再生的培养条件，建立姜荷花小花再生不定芽体系和增殖体系，为姜荷花组织培养快速繁殖和育种研究提供了技术支持，其有益效果在于：

1.由MS培养基+0.5mg/L TDZ+30g/L蔗糖+卡拉胶6.5g/L组成的诱导培养基可以诱导姜荷花小花产生不定芽，不同姜荷花材料均能诱导出不定芽，诱导率71.4％-100％。

2.姜荷花不定芽适宜在MS培养基+TDZ 0.2mg/L+NAA 0.2mg/L+卡拉胶6.5g/L中继代增殖，增殖系数达4以上。

3.本方法不需要另外进行生根培养，增殖后的姜荷花苗根系旺盛，可炼苗后直接进行移栽。

附图说明