[发明专利]一株高产溶葡萄球菌酶的大肠杆菌突变体

说明书

本发明提供了一种大肠埃希氏菌(Escherichia coil)BL21/(DE3)/pOpt‑lys 4‑36，保藏日期为2022年5月23号，保藏机构为中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.24960，本发明提供了大肠杆菌突变株，所产溶葡萄球菌酶为胞外分泌表达，且突变株的胞外溶葡萄球菌酶活性较原始菌株提高了3.1倍。

技术领域

本发明属于微生物产酶技术领域，具体涉及一种高产溶葡萄球菌酶的大肠杆菌突变体。

背景技术

溶葡萄球菌酶(lysostaphin,Lys)可以专一性地作用于金黄色葡萄球菌细胞壁中的Gly五肽交联桥，从而裂解其细胞壁，对金黄色葡萄球菌具有很好的溶菌杀菌效果。尽管溶葡萄球菌酶在预防和治疗葡萄球菌感染方面有非常大的应用潜力，但由于其生产成本较高，目前仍没有被广泛的应用。

常压室温等离子体(Atmospheric Room Temperature Plasma，ARTP)诱变系统能够在大气压下产生温度在25-40℃之间的、具有高活性粒子(包括处于激发态的氦原子、氧原子、氮原子、 OH自由基等)浓度的等离子体射流，来改变目标生物细胞壁和质膜的结构和通透性，进而引起DNA损伤，快速有效地突变细菌、放线菌、微藻、真菌、酵母等微生物。ARTP因其具有温度低，活性粒子浓度高且种类多样、对环境无污染和危害、操作简易、运行成本低廉等优点，已经成为发酵工业获得高产突变菌株的高效方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一株高产溶葡萄球菌酶的大肠杆菌突变体。

本发明结合ARTP诱变，对申请号为202210279685.2，专利申请名称为一种利用大肠杆菌产溶葡萄球菌酶的方法，该专利文献中记载的大肠杆菌工程菌 BL21(DE3)/pET22b(+)-Opt-Lys进行诱变获得了一株胞外溶葡萄球菌酶产量高的突变菌株。

本发明也提供了一种对诱变菌株进行高通量的筛选的方法。

本发明的技术方案如下：

一种大肠埃希氏菌(Escherichia coil)BL21/(DE3)/pOpt-lys 4-36，保藏日期为2022年5 月23号，保藏机构中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3 号，保藏编号CGMCC No.24960。

上述大肠埃希氏菌(Escherichia coil)BL21/(DE3)/pOpt-lys 4-36的培养方法，包括如下步骤：

将大肠埃希氏菌(Escherichia coil)BL21/(DE3)/pOpt-lys 4-36接种于含有氨苄青霉素的 LB培养基中，35-37℃，18-200rpm培养获得大肠埃希氏菌(Escherichia coil)BL21/(DE3)/pOpt -lys 4-36。

根据本发明优选的，LB培养基的成分组成为：蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化钠10g/L，余量水，pH值6.7。

根据本发明优选的，氨苄青霉素的终浓度为100μg/mL。

上述大肠埃希氏菌(Escherichia coil)BL21/(DE3)/pOpt-lys 4-36生产溶葡萄球菌酶的方法，包括如下步骤：

①将大肠埃希氏菌(Escherichia coil)BL21/(DE3)/pOpt-lys 4-36培养于含有氨苄青霉素的LB培养基，35-37℃摇床180-200rpm培养11-13h获得种子液。

②将种子液以体积分数2-3％的比例转接至含有氨苄青霉素的LB培养基中，培养到 OD₆₀₀至0.6-0.7。