[发明专利]一种检测血液中儿茶酚胺及其代谢物含量的方法

权利要求书

1.一种检测血液中儿茶酚胺及其代谢物含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将内标工作液与含有儿茶酚胺及其代谢物的标准工作液混合，得到标准溶液，所述标准工作液包括至少三个浓度梯度；

所述儿茶酚胺及其代谢物包括去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、去甲变肾上腺素、变肾上腺素和3-甲氧基酪胺；

(2)利用LC-MS/MS对标准溶液进行检测，并分别建立上述六种化合物的标准曲线；

(3)利用LC-MS/MS对待测样品进行检测，同时利用步骤(2)建立的标准曲线确定待测样品中上述六种化合物各自的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在LC-MS/MS检测中，使用的色谱分析柱为Waters HSS PFP或phenomenex F5。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在LC-MS/MS检测中，液相色谱参数包括：

色谱柱流动相：A为含有0.1-0.5v/v％甲酸、5-10mM甲酸铵或乙酸铵的水溶液，B为甲醇含有0-0.5v/v％甲酸、0-10mM甲酸铵或乙酸铵的甲醇溶液；

梯度洗脱为：

流速：0.3-0.6mL/min；

0.00-2.50min：A 98-100％，B 0-2％；

2.01-4.50min：A 60-90％，B 10-40％；

3.51-6.50min：A 98-100％，B 0-2％；

所述LC-MS/MS检测的分析时间为5.50-6.50min，优选5.50min。

4.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其特征在于，在LC-MS/MS检测中，质谱参数包括：

离子源温度：500-600℃；气帘气1：10-30L/min；碰撞气1：6-10L/min；IS电压：1500-3000V；干燥气1：45-60L/min；干燥气2：15-40L/min。

5.根据权利要求1-4中的任一项所述的方法，其特征在于，所述待测样品的制备方法包括：

取血浆或血清、内标工作液和pH缓冲液混合，混合液利用固相萃取柱进行萃取，取洗脱液作为待测样品。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述血浆选自EDTA血浆或者肝素锂血浆，优选为肝素锂血浆；

和/或，所述血浆或血清与pH缓冲液的体积比1:(1-2.5)，优选1:1.5；

和/或，所述血浆或血清与内标工作液的体积比(20-35):1；

和/或，所述pH缓冲液为甲酸铵溶液或乙酸铵溶液。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述利用固相萃取柱进行萃取的方法包括：

对固相萃取柱进行活化，然后将混合液转移至活化后的固相萃取柱，利用洗涤剂进行洗涤，最后利用洗脱液进行洗脱，取洗脱液作为待测样品；

优选地，所述洗涤剂为水和乙腈；

优选地，所述洗脱液为浓度为0.5-1v/v％的甲酸水溶液；

优选地，所述固相萃取柱利用甲醇和浓度为2v/v％的甲酸水溶液进行活化。

8.根据权利要求1-7中的任一项所述的方法，其特征在于，所述内标工作液中含有去甲肾上腺素-d6、肾上腺素-d3、多巴胺-d5、去甲变肾上腺素-d3、变肾上腺素-d3和3-甲氧基酪胺-d4。

9.根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其特征在于，所述标准溶液的制备方法包括：将内标工作液、含有儿茶酚胺及其代谢物的标准工作液和甲酸水溶液混合，得到所述标准溶液，所述标准工作液包括至少三个级别浓度，优选包括八个级别浓度；

各所述级别浓度的标准工作液均利用稀释剂由中间液稀释得到，所述中间液利用稀释剂由母液稀释得到，所述母液利用溶剂溶解所述儿茶酚胺及其代谢物各自的标准品得到。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述稀释剂为甲醇和水的体积比为1:(0-1)的甲醇水溶液，优选为浓度为0.04％的甲酸水溶液。