[发明专利]一种检测血液中儿茶酚胺及其代谢物含量的方法

说明书

本公开涉及一种检测血液中儿茶酚胺及其代谢物含量的方法，所述方法包括如下步骤：(1)将内标工作液与至少三种含有不同浓度的儿茶酚胺及其代谢物的标准工作液混合，制备至少三种标准溶液；所述儿茶酚胺及其代谢物为去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、去甲变肾上腺素、变肾上腺素和3‑甲氧基酪胺；(2)利用LC‑MS/MS对标准溶液进行检测，并分别建立上述六种化合物的标准曲线；(3)对待测样品进行检测，同时利用步骤(2)建立的标准曲线确定待测样品中上述六种化合物各自的含量。本公开提供的检测方法能够快速且准确地检测儿茶酚胺及其代谢物的含量，检测的准确性和灵敏度较高。

技术领域

本公开涉及化合物检测技术领域，尤其涉及一种检测血液中儿茶酚胺及其代谢物含量的方法，特别是一种LC-MS/MS检测血液中儿茶酚胺及其代谢物含量的方法。

背景技术

嗜铬细胞瘤起源于肾上腺髓质，副神经节瘤是起源于肾上腺外的交感神经链，均为具有激素分泌功能的神经内分泌肿瘤，主要合成、分泌和释放大量儿茶酚胺，包括去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)和多巴胺(DA)等，引起血压升高、代谢改变等一系列临床症候群，造成心、脑、肾、血管等重要器官损害，甚至成为死亡的主要原因。目前，带有嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(PPGL)的患者通常临床表现不典型，甚至有些无症状，即使有高血压，血压升高的表现也是多种多样的，但是若PPGL肿瘤突然分泌大量儿茶酚胺，则会出现血压骤升甚至高血压危象，严重可能导致死亡，目前对于PPGL的检测，首选对变肾上腺素(MN)进行定性诊断试验，但仍建议检测血或尿中的去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺及其他代谢产物，同时，检测3-甲氧基酪胺(3-MT)可提高诊断头颈部PPGL的灵敏度；而血浆中多巴胺和3-MT浓度明显增高则高度提示转移性肿瘤。

儿茶酚胺物质的化学结构特点是：带有一个双羟基苯核和一个带氨基的侧链，多数文献报道实际生物样品中儿茶酚胺含量极微，且活性的稳定性极差，极易氧化，此外加上生物样品中同时存在的各种结构相似和/或带有相同化学基团的代谢产物的内源性化学干扰物，导致了生物样本中儿茶酚胺浓度精确测定的困难，高选择性且高灵敏度地测定生物样本中某一种特定的儿茶酚胺类物质，例如精确同时测定血浆中儿茶酚胺及其代谢物，是目前尚难以达到的目标。

因此，提供一种前处理方法简单，且能够对儿茶酚胺及其代谢物含量快速准确测量、精确定量，且灵敏度高的方法是目前迫切需要的。

发明内容

为了解决上述技术问题，本公开提供了一种检测血液中儿茶酚胺及其代谢物含量的方法。

第一方面，本公开提供了一种检测血液中儿茶酚胺及其代谢物含量的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将内标工作液与含有儿茶酚胺及其代谢物的标准工作液混合，得到标准溶液，所述标准工作液包括至少三个浓度梯度；

所述儿茶酚胺及其代谢物为去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)、去甲变肾上腺素(NMN)、变肾上腺素(MN)和3-甲氧基酪胺(3-MT)；

(2)利用LC-MS/MS对标准溶液进行检测，并分别建立上述六种化合物的标准曲线；

(3)对待测样品进行检测，同时利用步骤(2)建立的标准曲线确定待测样品中上述六种化合物各自的含量。

本公开提供的方法能够同时实现去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、去甲变肾上腺素、变肾上腺素和3-甲氧基酪胺六种物质的检测，无需重复制样，能够缩短检测时间，提高检测效率。

在本公开中，在LC-MS/MS检测中，使用的色谱分析柱为Waters HSS PFP(2.1×100，2.5μm)、phenomenex F5(4.6×100，2.6μm)。

在本公开中，在LC-MS/MS检测中，液相色谱参数包括：