[发明专利]一种用于含苦参碱面霜舒缓功效的体外评测方法

说明书

本发明提供了一种用于含苦参碱面霜舒缓功效的体外功效宣称评价方法，通过以含苦参碱面霜的稀释液、纯化水、地塞米松或酮康唑的稀释液，透明质酸酶、醋酸溶液、透明质酸钠等物质，以地塞米松或酮康唑的稀释液透明质酸酶抑制率作为阳性对照，以面霜稀释液透明质酸酶抑制率与地塞米松或酮康唑稀释液的透明质酸酶抑制率进行对比，若面霜稀释液透明质酸酶抑制率达到地塞米松或酮康唑稀释液的透明质酸酶抑制率的50％以上(含50％)，即判定该面霜具有舒缓功效，若低于50％，则没有舒缓功效。此方法为舒缓类化妆品提供功效测评依据，该方法可解决目前舒缓类化妆品功效宣称评价费用较高、周期较长、过程繁琐、操作要求高、难度较大的问题。

技术领域

本发明属于化妆品功效测评技术领域，具体涉及一种用于含苦参碱面霜舒缓功效的体外测评方法。

背景技术

苦参碱是由豆科植物苦参Sophora flavescens Ait的干燥根、植株、果实经乙醇等有机溶剂提取制成的，是一种生物碱，一般为苦参总碱，其主要成分有苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、槐定碱等多种生物碱，以苦参碱、氧化苦参碱含量最高。其他来源为山豆根以及地上部分，苦参碱具有抗过敏、抗炎作用：能调节免疫和升高白细胞。近年有研究发现Oxy和苦参碱Mat有抗过敏作用，可抑制炎症介质的释放，可调节小鼠和大鼠腹腔肥大细胞组织胺释放，可有效抑制IgE交联及组胺、白三烯等介质释放，并具有稳定细胞膜作用。另有报道Oxy 100mg·；kg-1可提高肝微粒体细胞色素P450含量，可激活细胞膜上的腺苷酸环化酶，从而提高细胞内cAMP水平，Oxy 100mg/kg时对大鼠产生强烈的利胆作用，这种作用可能同升高细胞内钙水平有关。Oxy对免疫系统细胞增殖的影响同细胞状态密切相。

舒缓是化妆品的功效之一，根据国家药监局关于发布《化妆品功效宣称评价规范》的公告(2021年第50号)规定，化妆品备案需要做功效宣称试验。化妆品舒缓功效主要是针对由于皮肤屏障受损、神经功能异常、炎症反应等引起的皮肤出现灼热、刺痛、瘙痒，紧绷感，甚至出现红斑、鳞屑、发红(毛细血管扩张)等症状的人群。研究表明，透明质酸酶是Ⅰ型过敏反应的参与者，透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，研究报到称，各种肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶的活性，一些抗敏的物质有较强的抑制透明质酸酶的活性，因此抑制透明质酸酶的活性可以作为化妆品的舒缓功效的判定依据之一。

目前，化妆品舒缓功效评价方法有人体功效评价方法、细胞测试方法、消费者使用测试等方法，其中人体功效评价方法、消费者使用测试需要足够的样本(33个人)，且测试周期较长、费用较高；上海日用化学品行业协会发布的《化妆品舒缓功效测试体外-TNF-α炎症因子含量测定》(TSHRH033-2020)，该测试方法涉及细胞培养等试验，操作难度较大、要求较高。

因此，现目前需要一种操作简单、便捷、费用较低的含苦参碱面霜舒缓功效的体外测评方法。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于含苦参碱面霜舒缓功效的体外测评方法。

为了达到解决上述技术问题的技术效果，本发明是通过以下技术方案实现的：一种用于含苦参碱面霜舒缓功效的体外测评方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、取含苦参碱面霜、地塞米松软膏或酮康唑软膏，使用灭菌后的纯化水按照不同稀释倍数分别稀释2份备用；另取同等体积的2份纯化水，备用；

S2、分别取含苦参碱面霜稀释液、纯化水、地塞米松或酮康唑的稀释液两份，一份加入透明质酸酶溶液，另一份加入同等体积的醋酸缓冲液，保温放置；

S3、在S2中加入透明质酸酶溶液的混合液中加入透明质酸钠溶液、在另一份加入同等体积醋酸缓冲液，保温一段时间后取出冷却至室温；

S4、根据ELISA透明质酸酶试剂盒使用方法，往试剂盒中添加S3中的制得的两种混合液待测物质，测定吸光度(OD值)，通过OD值计算透明质酸酶的抑制率；