[发明专利]一种从微拟球藻中提取杀灭纤毛虫物质的方法

说明书

本发明涉及一种从微拟球藻中提取杀灭纤毛虫物质的方法，属于有机物提取的技术领域。本发明以微拟球藻(Nannochloropsisoceanica)LAMB204为原料，破碎后使用液相色谱法进行分离。所述微拟球藻LAMB204公开于申请号202110639406.4的专利中，保藏号为CGMCC NO.20713，保藏日期为2020年10月23日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编:100101。本发明提供了一种分离提纯微拟球藻LAMB204中可杀灭纤毛虫物质的方法，通过液相色谱法可以有效地将物质分离提取出来。为提取无毒无害的生物农药提供了一种新的方法。

技术领域

本发明属于有机物提取的技术领域，具体涉及一种从微拟球藻中提取杀灭纤毛虫物质的方法。

背景技术

在水产养殖业井喷式发展的同时，各类病害肆虐发生。近年来，在各类经济动植物的养殖中(鱼类、甲壳类、藻类和海参等)，由纤毛虫所导致的病害在发生范围及危害程度均呈递增趋势。当纤毛虫病发生时，水产市场上多采用硫酸铜、硫酸亚铁、硫酸锌、甲醛、菊酯类等为主要成分制作的药物进行治疗，甚至滥用孔雀石绿等禁用药物。上述提供的这些药物会造成水污染、药物残留、水产养殖动物抵抗力下降、致癌等严重后果，致使养殖品种退化和病害严重，最终生产者蒙受巨额经济损失。针对以上现象，如何从植物中提取无毒无害的生物农药是目前急需解决的问题。

发明内容

针对现有技术中缺少无毒无害生物农药的问题，本发明提供一种从微拟球藻中提取杀灭纤毛虫物质的方法，以解决上述问题。本发明分离提纯微拟球藻LAMB204中的有效物质，可以用于杀灭纤毛虫，为无毒无害的生物农药提供了一种新的方法。

本发明的技术方案为：

一种从微拟球藻中提取杀灭纤毛虫物质的方法，以微拟球藻(Nannochloropsisoceanica)LAMB204为原料，破碎后使用液相色谱法进行分离。所述微拟球藻LAMB204公开于申请号202110639406.4的专利中，保藏号为CGMCC NO.20713，保藏日期为2020年10月23日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编:100101。

所述微拟球藻LAMB204的破碎方法为：将微拟球藻LAMB204培养到平台期，将平台期的藻液在8000r/min下离心10min。将离心后的上清液过滤，确保上清液中没有藻细胞。

微拟球藻LAMB204的培养基为F/2海水培养基。所述F/2海水培养基包括以下物质：每1L海水包括：NaNO₃ 75mg、NaH₂PO₄·H₂O 5mg、Na₂SiO₃·9H₂O 20mg、Na₂EDTA 4.36mg、FeCl₃·6H₂O 3.16mg、CuSO₄·5H₂O 0.01mg、ZnSO₄·7H₂O 0.023mg、CoCl₂·6H₂O 0.012mg、MnCl₂·4H₂O 0.18mg、Na₂MoO₄·2H₂O 0.07mg、维生素B₁ 0.1mg、维生素B₁₂ 0.5μg、生物素0.5μg。

微拟球藻LAMB204的培养方法为：培养温度23±1℃，光照强度70μmolphotons/s/m²irradiation(12:12)，盐度30‰，pH＝7.8。

高效液相色谱方法如下：