[发明专利]一种富硒豆类中硒多糖的快速检测方法

权利要求书

1.一种富硒豆类中硒多糖的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，将待检测的富硒豆类粉末用无水乙醇和去离子水提取，之后将所得的上清液浓缩后进行固相萃取和洗脱，得到洗脱液，将洗脱液和三氟乙酸水溶液在无氧环境下于90~100 °C进行热处理，得到反应液，调节反应液的pH至7~8，最后涡旋、离心，所得上清液用甲醇稀释后过滤，得到提取液；

步骤2，将提取液利用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱，在全扫描的数据依赖扫描模式下，对未知硒多糖进行非定向筛查，得到每一种未知硒多糖分子的碎裂途径、同位素峰对应的质荷比和色谱峰峰面积；

将待检测的富硒豆类中含硫元素的多糖中的硫元素用硒元素替换，用得到的硒多糖分子式列表和结构式列表获取每一种硒多糖分子的理论碎裂途径和同位素峰对应的理论质荷比；

步骤3，通过比对每一种未知硒多糖分子的碎裂途径和理论碎裂途径，以及同位素峰对应的质荷比和同位素峰对应的理论质荷比，确定每一种未知硒多糖分子的分子式，最后利用每一种硒多糖分子的任意一个特征碎裂片段对应的标准溶液、同位素内标溶液和色谱峰峰面积，采用内标法，得到待检测的富硒豆类中每一种硒多糖分子的含量。

2.根据权利要求1所述的富硒豆类中硒多糖的快速检测方法，其特征在于，步骤1中，先将待检测的富硒豆类粉碎后过80~100目筛，再对得到的待检测的富硒豆类粉末进行提取。

3.根据权利要求2所述的富硒豆类中硒多糖的快速检测方法，其特征在于，步骤1将待检测的富硒豆类粉末用无水乙醇浸泡12~16 h后过滤，待检测的富硒豆类粉末和无水乙醇的比例为（0.5~1.0）g：（20~25）mL，之后按照1 g ：（20~25）mL的渣液比，向所得的滤渣中加入70~80 °C的去离子水，涡旋混匀，用70~80 °C的去离子水超声提取3~5次，每次30~60min，最后在4~10 °C下5000~10000 r/min离心15~20 min，重复3~5次，合并得到待浓缩的上清液。

4.根据权利要求1所述的富硒豆类中硒多糖的快速检测方法，其特征在于，步骤1先将固相萃取柱用甲醇活化，将活化后的固相萃取柱对浓缩后的上清液进行固相萃取，之后蒸馏水洗脱，蒸馏水与浓缩后的上清液的体积比为（2~3）：5，得到洗脱液。

5.根据权利要求4所述的富硒豆类中硒多糖的快速检测方法，其特征在于，步骤1中所述三氟乙酸水溶液的浓度为4 mol/L，洗脱液和三氟乙酸水溶液的体积比为1：（2~5），洗脱液和三氟乙酸水溶液于90~100 °C热处理3~6 h，之后冷却至室温得到反应液。

6.根据权利要求5所述的富硒豆类中硒多糖的快速检测方法，其特征在于，步骤1用4mol/L的 NaOH溶液调节反应液的pH，之后的离心在4000~8000 r/min下进行10~15 min，所得上清液用甲醇稀释5~10倍后过滤，得到提取液。

7.根据权利要求1所述的富硒豆类中硒多糖的快速检测方法，其特征在于，步骤2对未知硒多糖进行非定向筛查，先得到每一种未知硒多糖分子的一级质谱图和二级质谱图，再从二级质谱图中得到碎裂途径，从一级质谱图中得到同位素峰对应的质荷比。

8.根据权利要求1所述的富硒豆类中硒多糖的快速检测方法，其特征在于，步骤2中超高效液相色谱使用的是Hypersil Gold反相C18色谱柱，检测条件如下：

流动相A为甲酸铵、甲酸和蒸馏水的混合体系，其中甲酸铵的浓度为4 mmol/L，甲酸的体积浓度为0.1%，流动相B为甲酸铵、甲酸和甲醇的混合体系，其中甲酸铵的浓度为4 mmol/L，甲酸的体积浓度0.1 %；

流动相梯度洗脱程序为0~3 min内，流动相A的体积比例为97%，3~9 min内，流动相A的体积比例由97%线性减小至3%，9~11 min内，流动相A的体积比例为3%，11~14 min内，流动相A的体积比例由3%线性增加至97%，14~15 min内，流动相A的体积比例为97%；

柱温箱为25~35 °C，流速为0.1~0.3 mL/min。