[发明专利]一种富硒豆类中硒多糖的快速检测方法

说明书

本发明一种富硒豆类中硒多糖的快速检测方法，将富硒豆类粉末提取后上清液浓缩，再固相萃取和洗脱，将洗脱液和三氟乙酸溶液热处理，调节反应液pH后涡旋、离心，上清液稀释过滤得提取液；用超高效液相色谱‑四极杆静电场轨道离子阱质谱，对硒多糖非定向筛查，得到碎裂途径、同位素峰对应的质荷比和色谱峰峰面积；将富硒豆类中含硫元素多糖中的硫用硒替换，用得到的分子式列表和结构式列表获取理论碎裂途径和同位素峰对应的理论质荷比；比对硒碎裂途径和理论碎裂途径，以及同位素峰对应的质荷比和同位素峰对应的理论质荷比，确定分子式，利用特征碎裂片段对应的标准溶液、同位素内标溶液和色谱峰峰面积，得到富硒豆类中硒多糖分子的含量。

技术领域

本发明涉及硒多糖检测技术领域，具体涉及一种富硒豆类中硒多糖的快速检测方法。

背景技术

硒是人体必需的微量元素，具有许多生物活性。硒多糖作为一种重要的有机硒补充剂，是一种具有硒和多糖双重活性的有机硒化合物，其生物活性一般高于硒和多糖，更有利于人体的吸收利用。硒多糖的来源有天然硒多糖、微生物硒多糖和合成硒多糖。天然硒多糖普遍存在于动物、植物和微生物中。豆科植物是吸收、富集硒元素能力很强的聚硒型植物，能够将吸收的无机硒转化为有机硒，并将其以硒多糖的形式贮存在种子中，能提供优良的硒来源。多糖的结构是决定多糖类生物大分子物质生理活性的关键，为了明确结构与活性之间的关系，首先就要探究多糖的化学结构。

目前对于硒多糖的分析主要是针对其一级结构，即单糖残基、糖环构型、糖醛酸的存在、糖链与非糖部分的连接等，而且得到的结果以总糖的形式表达，而对于硒与糖环的结合方式及硒多糖的定量仍没有相关报道。此外，由于硒多糖具有高亲水性，结构中含有大量的同分异构体，复杂的连接方式，给硒多糖的结构分析带来更大的困难，因此目前还没有一种高效、高灵敏度的检测方法，可实现对豆科植物中硒多糖的定量分析检测。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供一种富硒豆类中硒多糖的快速检测方法，应用固相萃取法分离纯化得到天然的硒多糖，再运用超高效液相色谱-高分辨轨道离子阱质谱法进行非定向筛查分析，得到的每一种硒多糖分子的含量灵敏度高、准确性高。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种富硒豆类中硒多糖的快速检测的方法，包括以下步骤：

步骤1，将待检测的富硒豆类粉末用无水乙醇和去离子水提取，之后将所得的上清液浓缩后进行固相萃取和洗脱，得到洗脱液，将洗脱液和三氟乙酸水溶液在无氧环境下于90～100℃进行热处理，得到反应液，调节反应液的pH至7～8，最后涡旋、离心，所得上清液用甲醇稀释后过滤，得到提取液；

步骤2，将提取液利用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱，在全扫描的数据依赖扫描模式下，对未知硒多糖进行非定向筛查，得到每一种未知硒多糖分子的碎裂途径、同位素峰对应的质荷比和色谱峰峰面积；

将待检测的富硒豆类中含硫元素的多糖中的硫元素用硒元素替换，用得到的硒多糖分子式列表和结构式列表获取每一种硒多糖分子的理论碎裂途径和同位素峰对应的理论质荷比；

步骤3，通过比对每一种未知硒多糖分子的碎裂途径和理论碎裂途径，以及同位素峰对应的质荷比和同位素峰对应的理论质荷比，确定每一种未知硒多糖分子的分子式，最后利用每一种硒多糖分子的任意一个特征碎裂片段对应的标准溶液、同位素内标溶液和色谱峰峰面积，采用内标法，得到待检测的富硒豆类中每一种硒多糖分子的含量。

优选的，步骤1中，先将待检测的富硒豆类粉碎后过80～100目筛，再对得到的待检测的富硒豆类粉末进行提取。