[发明专利]用于PWS印记区基因表达分析的多重PCR检测方法

说明书

用于PWS印记区基因表达分析的多重PCR检测方法，属于分子生物学技术领域，该方法用于对基因组中MAGEL2基因进行表达分析，进而对染色体15q11.2‑q13区域PWS印记区的印记状态进行评估，以达到快速简便、准确度高的效果。本发明所采用的检测方法具有快速、高通量、所需标本量少、价格低廉、操作简单的优点，所需仪器设备为实验室常用设备，易于临床实验室开展。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及人类染色体15q11.2-q13区域PWS印记区基因表达分析的多重PCR检测方法。

背景技术

基因组印记(Genomic Imprinting)是一种特殊的表观遗传现象，是哺乳动物胚胎正常发育所必需的。基因组印记是指在二倍体细胞中，某些基因只有一个等位基因可以表达，且表达具有亲本特异性，即只有来自父本或母本一方的等位基因表达，而另一等位基因不表达或表达量很低。在胚胎发育、胎盘功能及人类疾病中均发挥关键作用，其功能异常可引发胚胎源性死胎、神经功能紊乱等，并可导致多种印记相关疾病，如Prader–Willi综合征(PWS)和Angelman综合征(AS)。大多数印记基因在染色体上是成簇存在的，成簇存在的印记基因的表达受印记区上印记调控区(Imprinting Control Region，ICR)的顺式调控元件的控制。ICR的甲基化程度在两条同源染色体上是不同的，这种差异性甲基化控制着胚胎中印记基因的正确表达。

15号染色体从染色体长臂端粒至着丝粒方向可依次分为远端非印记区域、Angelman综合征(AS)印记区、PWS印记区及非印记区域(近着丝粒处断裂点BPl和BP2间)4个亚区：在其PWS印记区包含仅父系表达的5个多肽编码基因(MKRN3、MAGEL2、NECDIN、双顺反子SNURF-SNRPN、C15orf2)，一组核仁小RNA(snoRNAs)以及一些反义转录本。在人类，PWS印记区域内的基因仅在神经系统高表达，而在其他组织低表达或无表达；由于组织无法获取，给该区域的表达分析带来了难度；且由于该区域结构的特殊性，传统技术对这一染色体区域进行分析常常需要多种技术联合应用才能明确基因的表达情况，如染色体核型分析、荧光原位杂交技术(FISH)、比较基因组杂交(aCGH)、DNA甲基化分析、MS-MLPA和DNA多态性等。上述技术不仅分析周期长、技术难度大、技术要求高，而且费时费力、费用较高，且需要多种技术联合才能得到明确结果，增加了患者的经济负担。迫切需要一种经济、简便、简单易行的检测方法对印记区域的基因表达情况进行分析。

发明内容

本发明旨在克服上述现有技术中的缺陷，提供一种可供临床选择的简单、易行、经济的用于染色体15q11.2-q13区域PWS印记区基因表达分析的多重PCR检测方法，该方法用于对基因组中MAGEL2基因进行表达分析，进而对15q11.2-q13区域的印记状态进行评估，以达到快速简便、准确度高的效果。

本发明采用的技术方案是：

提供一种围生期染色体15q11.2-q13区域印记基因表达分析的方法，包括选择检测的组织类型、检测项目及内容、判断标准。

组织类型：胎盘组织。

检测项目及内容：对胎盘组织中的mRNA进行提取，进行MAGEL2基因的PCR检测。MAGEL2基因(OMIM：605283)位于15号染色体q11.2-q13的PWS印记区，是黑色素瘤抗原基因家族(melanoma antigen gene family，MAGEs)的一员，编码1249个氨基酸，介导蛋白间相互作用；在调节细胞周期、受体循环、神经元信号转导及神经轴突生长等过程中发挥重要作用。该基因位于PWS关键区域内，正常情况下是一种母系印记、父源表达的基因；胚胎期MAGEL2在神经系统广泛表达，出生后MAGEL2 mRNA表达局限于在大脑的特定区域，尤其是下丘脑视交叉上核和室旁核。由于组织无法获取，给表达分析带来了难度。经数据库查询及文献检索：