[发明专利]一种用于定量检测污泥群落中功能菌的质粒标准品、构建方法及其应用在审
| 申请号： | 202210703703.5 | 申请日： | 2022-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN115521937A | 公开（公告）日： | 2022-12-27 |
| 发明（设计）人： | 车鉴;王秀文;张万;李振亚;纪峰 | 申请（专利权）人： | 大连鑫玉龙海洋生物种业科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;C12Q1/689;C12R1/01;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 吴波 |
| 地址： | 116222 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 定量 检测 污泥 群落 功能 质粒 标准 构建 方法 及其 应用 | ||
1.一种用于定量检测污泥群落中功能菌的质粒标准品，其特征在于，所述质粒标准品包括如SEQ ID NO.1所示的外源基因。
2.根据权利要求1所述的质粒标准品，其特征在于，所述功能菌为硝化杆菌Nitrobacter。
3.一种大肠杆菌基因工程菌株，其特征在于，所述大肠杆菌基因工程菌株含有权利要求1所述的质粒标准品。
4.权利要求1所述质粒标准品的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：
利用引物扩增得到外源基因后将其插入pGM-T载体即得所述质粒标准品。
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述质粒标准品的核苷酸序列如SEQID NO.2所示；所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述外源基因通过在pGM-T载体的酶切位点两侧的3’端添加T进行插入。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述酶切位点为EcoRV酶切位点。
8.权利要求1-3任意一项所述的质粒标准品或权利要求4-7任意一项所述构建方法得到的质粒标准品在检测硝化杆菌中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用为定量检测硝化杆菌的16s基因的表达量。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述检测方法为实时荧光定量PCR法。
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