[发明专利]利用甲壳素酶SaChiZg制备高纯度甲壳二糖的方法

说明书

本发明公开了一种利用甲壳素酶SaChiZg制备高纯度甲壳二糖的方法：采用甲壳素酶SaChiZg降解胶质甲壳素，所述甲壳素酶SaChiZg的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用甲壳素酶SaChiZg降解甲壳素，降解产物主要为甲壳二糖，乙酰产物的聚合度明确且可控制；且降解时间越长，甲壳二糖在降解产物中的比例越高。本发明的利用甲壳素酶SaChiZg制备甲壳二糖的方法，可在较短时间内得到纯度更高的甲壳二糖，对工业化生产甲壳二糖有着重要意义。

技术领域

本发明涉及一种利用甲壳素酶SaChiZg制备高纯度甲壳二糖的方法，属于功能酶技术领域。

背景技术

甲壳素是仅次于纤维素的第二大天然多糖，由N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)通过β-1，4糖苷键连接而成，是一类高分子聚合物，广泛分布于自然界中。相较于甲壳素，其降解产物甲壳寡糖及其衍生物具有抗菌、抗炎、抗氧化、辅助降血脂等特殊的生物活性和营养功能，具有更高的利用价值，符合海洋强国的战略思想。近年来，随着酶工程研究的逐渐深入，甲壳素酶被发掘与应用为制备甲壳寡糖提供了新思路。酶法降解甲壳素绿色环保，过程可控，特别是对于制备明确聚合度的寡糖具有化学法无可比拟的优越性。由于不同甲壳素酶的水解模式、水解产物存在较大差异。目前报道的甲壳素酶制备寡糖的方法多集中在对于甲壳寡糖混合物的制备上(CN111286464A和CN113088547A)。不同特性甲壳素酶的挖掘与应用对于研究结构-功能关系，以及开发合适的高值化产品具有重要意义。因此，通过甲壳素酶的酶促反应水解制备可控制的确定组成的甲壳寡糖，构建高效制备高纯度寡糖体系尤为重要。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种利用甲壳素酶SaChiZg制备高纯度甲壳二糖的方法。本发明利用甲壳素酶SaChiZg降解甲壳素，降解的主要产物为甲壳二糖，乙酰产物的聚合度明确且可控制。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种利用甲壳素酶SaChiZg制备高纯度甲壳二糖的方法：采用甲壳素酶SaChiZg降解胶质甲壳素，降解产物中主产物为甲壳二糖；所述甲壳素酶SaChiZg的氨基酸序列如SEQID NO.1所示。

进一步地，具体方式为：向胶质甲壳素溶液中加入含甲壳素酶SaChiZg的酶液，30～55℃下降解，时间30分钟以上，所得降解产物主要为甲壳二糖。

进一步地，所述胶质甲壳素溶液的pH为5.0～9.0，优选6.0；更进一步地，是由柠檬酸缓冲液和胶质甲壳素组成的。

进一步地，所述降解的具体条件为：50℃下降解1～12小时。

更进一步地，具体方式为：向100μL的20mg/mL的胶质甲壳素溶液中加入10μL的浓度为14.39mg/L的含甲壳素酶SaChiZg的酶液，50℃反应12小时，所得降解产物主要为甲壳二糖，甲壳二糖的纯度为92.3％；所述胶质甲壳素溶液是由柠檬酸缓冲液(pH为6.0，浓度为50mmol/l)和胶质甲壳素组成的。

本发明利用甲壳素酶SaChiZg降解甲壳素，降解产物主要为甲壳二糖，乙酰产物的聚合度明确且可控制；且降解时间越长，甲壳二糖在降解产物中的比例越高。本发明的利用甲壳素酶SaChiZg制备甲壳二糖的方法，可在较短时间内得到纯度更高的甲壳二糖，对工业化生产甲壳二糖有着重要意义。本发明的甲壳素酶SaChiZg具有优良的酶学性质和特异性，在酶法降解甲壳素中具有重要的工业应用价值以及经济价值。

本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。

附图说明

图1：甲壳素酶SaChiZg的进化树示意图。

图2：SDS-PAGE电泳图，其中，M为标准蛋白Marker；1为粗酶蛋白；2为目的蛋白。

图3：温度对相对酶活的影响示意图。