[发明专利]编码ALDH2多肽的mRNA分子、应用及mRNA药物

权利要求书

1.编码ALDH2多肽的核酸分子，其特征在于，包括(a)～(c)任一种：

(a)具有SEQ ID No.15～18任一条所示的编码ALDH2多肽的核苷酸序列的mRNA分子；

(b)在(a)限定的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸，具有编码ALDH2多肽功能且与原核苷酸序列具有相同GC碱基对百分比含量的由(a)衍生的mRNA分子；

(c)在严格条件下与(a)或(b)限定的mRNA分子杂交，且ALDH2多肽的核酸分子。

2.构建体，其特征在于，所述构建体包括权利要求1所述的核酸分子，所述构建体的核苷酸序列还包括UTR序列、5’帽子和poly(A)序列；

优选地，所述5’帽子包括7-甲基-鸟苷-5’-三磷酸-5’-腺苷、鸟苷-5’-三磷酸-5’-腺苷、7-甲基-鸟苷-5’-三磷酸-5’-鸟苷、鸟苷-5’-三磷酸-5’-鸟苷和m⁷G(5’)(2’-OMeA)pG中的一种或几种；优选为m⁷G(5’)(2’-OMeA)pG；

优选地，所述poly(A)序列中碱基A的数量为60～120，进一步优选为100；

优选地，所述UTR序列包括5’UTR序列和3’UTR序列；

进一步优选地，所述5’UTR序列具有SEQ ID No.1或SEQ ID No.13所示的核苷酸序列；

进一步优选地，所述3’UTR序列具有SEQ ID No.3或SEQ ID No.14所示的核苷酸序列。

3.权利要求1所述核酸分子或权利要求2所述构建体在制备mRNA药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述mRNA药物的用途包括(ⅰ)或(ⅱ)：

(ⅰ)补充ALDH2酶；

(ⅱ)预防和/或治疗酒精代谢性疾病；

优选地，所述酒精代谢性疾病包括酒精引发的肝损伤或酒精性肝炎。

5.mRNA药物，其特征在于，所述mRNA药物包括权利要求1所述的核酸分子或权利要求2所述的构建体。

6.根据权利要求5所述的mRNA药物，其特征在于，所述mRNA药物还包括包裹权利要求1所述核酸分子或权利要求2所述构建体的脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒组成包括Dlin-MC3-DMA、DSCP、胆固醇和PEG-DMG。

7.根据权利要求6所述的mRNA药物，其特征在于，所述脂质纳米颗粒按照摩尔份数计包括，20～50份的Dlin-MC3-DMA、5～20份的DSCP、20～50份的胆固醇和1～5份的PEG-DMG。

8.根据权利要求7所述的mRNA药物，其特征在于，所述脂质纳米颗粒按照摩尔份数计包括50份的Dlin-MC3-DMA、10份的DSCP、38.5份的胆固醇和1.5份PEG-DMG。

9.权利要求5～8任一项所述mRNA药物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

(A)将编码ALDH2多肽的RNA溶解于缓冲液，将浓度调整为0.05mg/mL～0.5mg/mL，得到水相；

(B)将Dlin-MC3-DMA、DOPG、胆固醇和PEG-DMG溶解于无水乙醇，将有机相中的脂质成分的浓度调整至5mg/mL～7mg/mL，得到有机相；

(C)将步骤(A)的水相和步骤(B)的有机相按照1：3的体积比混合，除去乙醇后浓缩至体系中的mRNA的浓度为50μg/mL～1000μg/mL，得到包含编码ALDH2多肽的RNA的脂质纳米颗粒。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

(A)将编码ALDH2多肽的RNA溶解于pH4的柠檬酸盐缓冲液，将浓度调整为0.1mg/ml，得到水相；

(B)将Dlin-MC3-DMA、DOPG、胆固醇和PEG-DMG溶解于无水乙醇，将有机相中的脂质成分的浓度调整至6mg/mL，得到有机相；

(C)将步骤(a)的水相和步骤(b)的有机相按照1：3的体积比，使用微流控设备，按照12mL/min的流速混合，混合液立刻用pH7.4的PBS溶液稀释100倍，并使用切向流过滤除去溶液中乙醇，然后浓缩至体系中的mRNA的浓度为550μg/ml，得到包含编码ALDH2多肽的RNA的脂质纳米颗粒。