[发明专利]基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组、鉴别方法及鉴别试剂盒在审
| 申请号： | 202210706985.4 | 申请日： | 2022-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN114854881A | 公开（公告）日： | 2022-08-05 |
| 发明（设计）人： | 褚栋;杨力凤;董兆克;陶云荔;国栋 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 山东三邦知识产权代理事务所(普通合伙) 37308 | 代理人： | 牛继梅 |
| 地址： | 266109 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 lamp 方法 番茄 潜叶蛾 鉴别 引物 鉴别方法 试剂盒 | ||
1.一种基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组，其特征在于，根据SEQ ID NO:1所示核酸序列设计而成。
2.根据权利要求1所述基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组，其特征在于，所述引物组由核苷酸序列为SEQ ID NO:2的F3引物、核苷酸序列为SEQ ID NO:3的B3引物，核苷酸序列为SEQ ID NO:4的FIP引物以及核苷酸序列为SEQ ID NO:5的BIP引物组成。
3.权利要求2所述基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组在番茄潜叶蛾鉴别中的应用。
4.一种鉴别番茄潜叶蛾的方法，其特征在于，采用权利要求2的引物组，以待测昆虫的全基因组DNA或待测昆虫的部分组织为模板，进行LAMP反应；反应结束后，检测是否有扩增产物；若有扩增，则待测样本为番茄潜叶蛾。
5.根据权利要求4所述鉴别番茄潜叶蛾的方法，其特征在于，所述LAMP反应的条件为：63℃45min，80℃灭活10min。
6.根据权利要求4所述鉴别番茄潜叶蛾的方法，其特征在于，通过向LAMP反应后的体系中加入核酸染料，来检测是否有扩增产物。
7.根据权利要求6所述鉴别番茄潜叶蛾的方法，其特征在于，所述核酸染料的添加方式为：在配制好LAMP反应体系后，在反应管的内部上端设置一个活动的且不与反应体系接触的隔膜，并将核酸染料滴加在隔膜上，然后盖上盖子进行反应，在反应结束后通过离心使隔膜上的核酸染料混进反应后的体系中，通过观察显色结果来判定是否有扩增产物。
8.根据权利要求7所述鉴别番茄潜叶蛾的方法，其特征在于，所述核酸染料为钙黄绿素或SYBR Green I。
9.一种基于可视化LAMP技术鉴别番茄潜叶蛾的便携试剂盒，其特征在于，包含LAMP引物组，所述LAMP引物组由核苷酸序列为SEQ ID NO:2的F3引物、核苷酸序列为SEQ ID NO:3的B3引物，核苷酸序列为SEQ ID NO:4的FIP引物以及核苷酸序列为SEQ ID NO:5的BIP引物组成。
10.根据权利要求9所述基于可视化LAMP技术鉴别番茄潜叶蛾的便携试剂盒，其特征在于，还包含核酸染料、Bst DNA大片段聚合酶、10×ThermoPol缓冲液、100mmol/L MgSO4、10mmol/L的dNTP混合液、5mol/L的Betaine、活动隔膜和恒温工具随行杯。
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