[发明专利]基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组、鉴别方法及鉴别试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组、鉴别方法及鉴别试剂盒，属于农业害虫鉴别技术领域。本发明基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组，是根据SEQID NO:1所示核酸序列设计而成；采用该引物组，以待测昆虫的全基因组DNA或部分组织为模板，进行LAMP反应；反应结束后，检测是否有扩增产物；若有扩增，则待测昆虫为番茄潜叶蛾。本发明用快速分子检测加可视化方法鉴别番茄潜叶蛾，在1小时内获得检测结果。免开盖的可视化检测方法可以有效避免气溶胶污染，能够准确显色，显色结果肉眼可见，不需要昂贵的仪器设备，适用于现场、基层快速鉴别番茄潜叶蛾。

技术领域

本发明属于农业害虫鉴别技术领域，具体涉及一种基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组、鉴别方法及鉴别试剂盒。

背景技术

番茄潜叶蛾(Tuta absoluta(Meyrick))属鳞翅目(Lepidoptera)麦蛾科(Gelechiidae)，该虫原产于秘鲁安第斯山脉地区，是全球番茄生产最具入侵性与破坏性的害虫之一。该虫寄主范围较广，已经记录的有9科39种，可为害蔬菜、水果、烟草、粮食作物、糖料作物和杂草等多类植物，主要危害茄科植物，已在美洲、欧洲、非洲和亚洲等80多个国家和地区发生，虫害发生后，会造成严重的番茄减产，减产率高达80％，严重情况下减产率甚至会达到100％。严重影响蔬菜品质。由此可见，做好番茄潜叶蛾的监测防控，杜绝番茄潜叶蛾的危害，是实现高品质、高效益蔬菜的重中之重。

由于番茄潜叶蛾体型较小，并且在幼虫阶段就开始进行危害，常隐蔽发生，对环境、经济等造成了损失，从而严重影响了蔬菜生产和国际贸易，被许多国家和地区列为重要的进境植物检疫性有害生物。

长期以来，番茄潜叶蛾的鉴定主要是基于其形态特征而确定的，由于生活环境不同，番茄潜叶蛾形态特征会随之发生相应的变化，给鉴定带来困难。而且，在蔬菜的检疫过程中，检测到的通常是番茄潜叶蛾幼虫，通过传统形态学法很难对番茄潜叶蛾幼虫进行准确鉴定，这给番茄潜叶蛾的检疫防控带来困难。

目前，虽然有针对番茄潜叶蛾的特异性引物识别技术。例如，申请号为201310058012.5的中国专利申请公开番茄潜叶蛾特异性SS-COI引物及快速PCR检测方法和试剂盒。该引物只对番茄潜叶蛾具有扩增能力。但是采用PCR技术，一般耗时5小时，耗时长，过程繁琐受检测材料限制、对实验仪器及检测人员的技术要求高等缺点，因此难以满足基层实验室的检测需求。

发明内容

针对于现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种基于可视化LAMP技术检测番茄潜叶蛾的方法及应用。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组，是根据SEQ ID NO:1所示核酸序列设计而成。

在一个具体的实施例中，所述引物组由核苷酸序列为SEQ ID NO:2的F3引物、核苷酸序列为SEQ ID NO:3的B3引物，核苷酸序列为SEQ ID NO:4的FIP引物以及核苷酸序列为SEQ ID NO:5的BIP引物组成。

上述基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组在番茄潜叶蛾鉴别中的应用。

一种鉴别番茄潜叶蛾的方法，采用上述的引物组，以待测昆虫的全基因组DNA或待测昆虫的部分组织为模板，进行LAMP反应；反应结束后，检测是否有扩增产物；若有扩增，则待测昆虫为番茄潜叶蛾。

所述待测昆虫的部分组织可以为成虫腿部、胸部或腹部组织，也可以为幼虫部分腹节组织。

在一个具体的实施例中，所述LAMP反应的条件为：63℃45min，80℃灭活10min。

在一个具体的实施例中，通过向LAMP反应后的体系中加入核酸染料，来检测是否有扩增产物；所述核酸染料为钙黄绿素或SYBR Green I，在一个具体的实施例中，为SYBRGreen I。