[发明专利]藻菌协同增效的刺参用复合免疫增强剂、制备和应用方法

权利要求书

1.一种藻菌协同增效的刺参用复合免疫增强剂，其特征在于，所述复合免疫增强剂的组分至少包括半裸舟形藻以及沼泽红假单胞菌，其中，在各实验组的单位重量刺参饲料中的添加浓度为半裸舟形藻10⁷～10⁹cell/g和沼泽红假单胞菌10⁶～10⁸cfu/g。

2.根据权利要求1所述的复合免疫增强剂，其特征在于，所述复合免疫增强剂在所述各实验组的单位重量刺参饲料中的添加浓度为：所述半裸舟形藻10⁸cell/g，所述沼泽红假单胞菌10⁷cfu/g。

3.一种藻菌协同增效的刺参用复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于，所述复合免疫增强剂的组分至少包括半裸舟形藻以及沼泽红假单胞菌，在各实验组的单位重量刺参饲料中的添加浓度为半裸舟形藻10⁷～10⁹cell/g和沼泽红假单胞菌10⁶～10⁸cfu/g，所述半裸舟形藻的制备方法包括以下步骤：

(1)将冻存的所述半裸舟形藻解冻后置于250mL三角瓶中培养，初始接种量为10⁵cell/mL，培养液为f/2培养基；

(2)将所述三角瓶置于全自动光照培养箱中培养，每日人工摇晃藻种3～5次并取适量所述半裸舟形藻的藻液进行计数以确定对数生长期；

(3)用于所述半裸舟形藻的培养温度为20～25℃，盐度为29～32，初始pH7.5～8.5，光照周期为12L/12D，光照强度为2200～2800lx，氮磷比为10～20；

(4)待所述半裸舟形藻培养至对数生长期后，刮取附着所述培养基上所述半裸舟形藻的藻细胞，用无菌海水重悬，采用比浊法调整藻液浓度。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述复合免疫增强剂在所述各实验组的单位重量刺参饲料中的添加浓度为：所述半裸舟形藻10⁸cell/g，所述沼泽红假单胞菌10⁷cfu/g。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：用于所述半裸舟形藻的培养基为改良的f/2培养基，其中添加玉米素ZT浓度为1～2mg/L。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述沼泽红假单胞菌的制备方法为：

(1)将所述沼泽红假单胞菌冻干粉菌溶解于无菌蒸馏水中，将所述沼泽红假单胞菌的菌种在固体培养基上划线活化，固体平板在光照度为2500lx，温度为30℃的条件下于厌氧培养箱中培养3～5天，至所述固体平板出现红色单菌落，所述沼泽红假单胞菌的固体培养基的成分至少包括胰蛋白胨15.0g/L、大豆胨5.0g/L、氯化钠5.0g/L和琼脂20g/L，酸碱值为pH7.5～8.0；

(2)挑取所述红色单菌落接种于所述沼泽红假单胞菌的液体培养基中，所述液体培养基的培养温度为30℃，光照强度为2500lx，于厌氧培养箱中静置培养3～5天，至所述沼泽红假单胞菌的菌种增殖至对数生长期且菌液转变为深红色；

(3)于6000rpm离心10min，收集所述沼泽红假单胞菌的菌体，用无菌海水重悬菌体，采用麦氏比浊法调整菌液浓度。

7.一种根据权利要求1所述的藻菌协同增效的刺参用复合免疫增强剂的应用方法，其特征在于，所述复合免疫增强剂的组分至少包括半裸舟形藻以及沼泽红假单胞菌，在各实验组的单位重量刺参饲料中的添加浓度为半裸舟形藻10⁷～10⁹cell/g和沼泽红假单胞菌10⁶～10⁸cfu/g，其中，所述应用方法为将所述半裸舟形藻及所述沼泽红假单胞菌按特定比例添加到刺参饲料中，加少量海水搅拌均匀后对刺参进行投喂。

8.根据权利要求7所述的应用方法，其特征在于，所述半裸舟形藻与所述沼泽红假单胞菌互利共栖、协同增效，在保证所述沼泽红假单胞菌代谢活动的同时，又提高了所述半裸舟形藻的生物量积累速度。

9.根据权利要求7所述的应用方法，其特征在于：所述半裸舟形藻通过光合作用产生氧气，所述沼泽红假单胞菌利用氧气矿化有机物，分解水体中至少包括氨基氮、亚硝基氮、硫化氢的有害物质，将所述有害物质转化为利于所述半裸舟形藻生长的营养源，同时生成二氧化碳以供所述半裸舟形藻的藻细胞进行光合利用。