[发明专利]一种强杀伤性NK细胞的培养基及体外扩增方法在审
| 申请号： | 202210716228.5 | 申请日： | 2022-06-23 |
| 公开（公告）号： | CN114891742A | 公开（公告）日： | 2022-08-12 |
| 发明（设计）人： | 俞英豪;王冶陶;彭昉;蔡燕萍 | 申请（专利权）人： | 杭州中赢生物医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 杭州航璞专利代理有限公司 33498 | 代理人： | 崇鑫 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 杀伤性 nk 细胞 培养基 体外 扩增 方法 | ||
1.一种强杀伤性NK细胞培养基，其特征在于，以Cellgro基础培养基为基础，向其中添加人血清白蛋白、尼克酰胺、来那度胺、4-羟乙基哌嗪乙磺酸和虫草素；
人血清白蛋白浓度为8-12g/L，尼克酰胺浓度为2.5-7.5mmol/L，来那度胺浓度为0.5-2.0μmol/L，4-羟乙基哌嗪乙磺酸浓度为8-16mmol/L，虫草素浓度为0.1-0.5g/L。
2.根据权利要求1所述强杀伤性NK细胞培养基，其特征在于，虫草素和来那度胺的质量比为2000-4000：2.59-4.66。
3.根据权利要求1所述强杀伤性NK细胞培养基，其特征在于，尼克酰胺和来那度胺的摩尔比为4500-6500：1-1.8 。
4.根据权利要求1所述强杀伤性NK细胞培养基，其特征在于，4-羟乙基哌嗪乙磺酸浓度为10-14mmol/L。
5.一种强杀伤性NK细胞的体外扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将外周血进行分离得到PBMC细胞；将PBMC细胞进行磁珠分选得到NK细胞；
S2、将NK细胞悬于如权利要求1-4所述强杀伤性NK细胞培养基中，然后转移至细胞培养瓶中；
继续向细胞培养瓶中加入自体血浆及5-15μg/mL抗Her-2单克隆抗体、900-1100U/mL重组人IL-2、25-35ng/mL IGF-1、5-15ng/mL OKT-3，然后将细胞培养瓶置于培养箱中培养；
S3、每隔3天补加如权利要求1-4所述强杀伤性NK细胞培养基、900-1100U/mL重组人IL-2、25-35ng/mL重组人IL-15、5-15ng/mL重组人IL-21，继续培养；
S4、培养14天后，从培养袋中取出细胞，获得强杀伤性NK细胞。
6.根据权利要求5所述强杀伤性NK细胞的体外扩增方法，其特征在于，S2中，自体血浆体积占细胞培养瓶体积为20％。
7.根据权利要求5所述强杀伤性NK细胞的体外扩增方法，其特征在于，S2中，抗Her-2单克隆抗体浓度为5-15μg/mL。
8.根据权利要求5所述强杀伤性NK细胞的体外扩增方法，其特征在于，S2中，OKT-3浓度为8-12ng/mL。
9.根据权利要求5所述强杀伤性NK细胞的体外扩增方法，其特征在于，S3中，重组人IL-2浓度为950-1050U/mL。
10.根据权利要求5所述强杀伤性NK细胞的体外扩增方法，其特征在于，S3中，重组人IL-15浓度为28-32ng/mL。
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