[发明专利]一种高纯度NK细胞体外扩增培养方法在审
| 申请号： | 202210716229.X | 申请日： | 2022-06-23 |
| 公开（公告）号： | CN114891743A | 公开（公告）日： | 2022-08-12 |
| 发明（设计）人： | 俞英豪;王冶陶;彭昉;叶志春 | 申请（专利权）人： | 杭州中赢生物医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 杭州航璞专利代理有限公司 33498 | 代理人： | 崇鑫 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 纯度 nk 细胞 体外 扩增 培养 方法 | ||
1.一种高纯度NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、向GT-T551基础培养基中加入IL-2、IL-12、IL-15、IL-17、黄芩素、姜黄素、云芝多糖，得到NK细胞培养基；
NK细胞培养基中，IL-2的浓度为500-600μg/mL，IL-12的浓度为300-400ng/mL，IL-15的浓度为40-80ng/mL，IL-17的浓度为120-200ng/mL，黄芩素的浓度为10-20μg/mL，姜黄素的浓度为10-20μg/mL，云芝多糖的浓度为15-25μg/mL；
S2、采集并分离自体外周血的单个核细胞，加入至NK细胞培养基中重悬细胞，加入细胞培养瓶中，置于37℃、5％二氧化碳的培养箱中孵育，每隔2天，补加含IL-2的GT-T551培养基，培养至第7天，扩瓶培养；培养至第14天，获得高纯度NK细胞。
2.根据权利要求1所述高纯度NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，S1的NK细胞培养基中，黄芩素、姜黄素、云芝多糖的质量比为12-18：13-17：18-22。
3.根据权利要求1所述高纯度NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，S1的NK细胞培养基中，IL-2的浓度为530-580μg/mL。
4.根据权利要求1所述高纯度NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，S1的NK细胞培养基中，IL-12的浓度为330-370ng/mL。
5.根据权利要求1所述高纯度NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，S1的NK细胞培养基中，IL-15的浓度为50-70ng/mL。
6.根据权利要求1所述高纯度NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，S1的NK细胞培养基中，IL-17的浓度为140-180ng/mL。
7.根据权利要求1所述高纯度NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，S2中，细胞培养瓶采用CD3抗体与CD56抗体进行包被。
8.根据权利要求1所述高纯度NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，S2中，孵育过程中采用1-5次/min的速度振摇。
9.根据权利要求1所述高纯度NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，S2的含IL-2GT-T551培养基中，IL-2的浓度为500-600μg/mL。
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