[发明专利]一种平板菌落计数方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种平板菌落计数方法。本申请的平板菌落计数方法，将目标菌通过梯度稀释，然后从高到低选取适宜的目标菌稀释度在超净工作台内进行培养基平板上的无菌水推动平铺，即，采用移液器分别吸取一定量的无菌水和目标菌悬浮液依次滴入培养基平板中心处，然后利用重力及水的推动力使目标菌平铺，再将培养基平板放入恒温厌氧环境下进行培养，最终对目标菌进行计数。本发明可应用于多种需要平板菌落计数法进行计数的目标菌的检测，无需借助于涂布棒进行涂布，可以节约时间，减少因借助外物带来的污染，并且检测数据很稳定且与用涂布棒平铺目标菌的结果一致。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的涉及一种平板菌落计数方法。

背景技术

菌落计数是微生物实验中最普遍的实验之一，是统计物品含菌数的有效方法，广泛用于食品、饮料、药品、生物制品、化妆品、卫生用品、饮用水、生活污水、工业废水、临床标本中细菌数的检验。一般是利用培养皿在固体培养基上(内)以特定条件进行培养，培养出以微生物母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞的集团，即菌落，通过菌落计数可以确定病原菌是否存在及其数量或用于判定食品被污染程度等。传统方法为人工目测计数，工作效率低。

目前，实验室中也常常采用涂布棒对带菌液体或药剂进行平板涂布平铺，进而进行培养、计数，但涂布棒在使用时都需要进行高温灼烧后才能使用，以消除前一次操作残留的菌液，还需等待涂布棒冷却至室温才可使用，浪费大量时间的同时，还易被污染影响实验结果的准确性。

发明内容

本发明的目的在于克服以上技术问题提出一种平板菌落计数方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种平板菌落计数方法，包括以下步骤：

S1、制备样品：吸取0.3ml无菌生理盐水至培养基平板中心处，并将无菌生理盐水平铺于培养基平板内，得到阴性对照样品；

S2、梯度稀释：将目标菌进行梯度稀释，得到梯度稀释的目标菌悬浮液，从高到底选取适宜的稀释度进行检测；

S3、平铺目标菌：采用移液器分别吸取一定量的无菌水和目标菌悬浮液依次滴入培养基平板中心处，然后利用重力及水的推动力使目标菌平铺；

S4、恒温培养：将各稀释度的培养基平板置于恒温的环境中培养；

S5、观察计数：各稀释度的培养基平板内形成目标菌的特定菌落，数出各培养基平板形成的菌落数目。

进一步的，所述步骤S2中将目标菌进行梯度稀释包括将目标菌加入无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1x10^-3、1:1x10^-4、1:1x10^-5、1:1x10^-6……1:1x10^-n稀释的目标菌悬浮液，其中n3。

进一步的，所述步骤S3中依次吸取并滴入包括先用移液器吸取无菌水于培养基平板中心处，再用另一根移液器吸取目标菌悬浮液滴入无菌水的位置上。

进一步的，所述无菌水的吸取量为0.2ml，所述目标菌悬浮液的吸取量为0.1ml。

进一步的，所述步骤S3中每一个目标菌悬浮液选取3个稀释度，每一个稀释度做3个平行。

进一步的，所述选取3个稀释度包括10^-7、10^-6、10^-5稀释度的目标菌悬浮液。

进一步的，所述步骤S4中恒温培养条件为恒温37℃，培养24-48h。

进一步的，所述步骤S5中每份目标菌落数在30-300个的培养基平板均作为统计对象。