[发明专利]一株高产吲哚衍生物且具有耐酸耐胆盐特性的罗伊氏乳杆菌及其筛选方法与应用

说明书

本发明公开了一株高产吲哚衍生物且具有耐酸耐胆盐特性的罗伊氏乳杆菌及其筛选方法与应用，属于微生物领域。本发明利用MRS培养基自健康人体粪便样分离筛选出保藏编号为CGMCC No.24755的菌株(L.reuteri GH226‑12)，先后经形态学、生理生化和16s rRNA测序鉴定后，对分离得到的罗伊氏乳杆菌，利用UPLC‑Q‑Orbitrap MS/MS技术对其吲哚衍生物产量进行检测筛选得到。该检测方法改善了复杂培养体系中吲哚衍生物难以检测的困难，具有线性范围广、灵敏度高、样本需要量少和操作简便等优点。最后对L.reuteri GH226‑12耐酸耐胆盐情况进行评价，证实了高产吲哚衍生物的罗伊氏乳杆菌(L.reuteriGH226‑12)能够耐受人体消化道的酸碱环境，可用于食品或药品的开发。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株高产吲哚衍生物且具有耐酸耐胆盐特性的罗伊氏乳杆菌及其筛选方法与应用。

背景技术

研究表明，人体膳食中仅有5％左右的色氨酸在人体小肠中被吸收利用，相当比例未被吸收的色氨酸到达结肠后，会被肠道微生物利用，产生多种吲哚衍生物，发挥调节宿主免疫、改变宿主与微生物相互作用模式等功能。色氨酸的代谢路径主要包括5-羟色胺酸代谢路径、吲哚丙酮酸代谢路径以及犬尿氨酸代谢路径。其中，人体肠道微生物产生的吲哚衍生物可作为人体细胞表面芳香烃受体(AhR)的配体，不仅具有调节宿主免疫，增强肠上皮屏障的功能，还可作为神经递质调节肠道激素分泌，刺激胃肠运动，甚至可以进入循环系统清除体内游离自由基。

众多吲哚衍生物中，最具代表性的化合物为吲哚-3-乳酸、吲哚-3-乙酸和吲哚-3-丁酸，它们都具有特殊的生理功能，例如：吲哚-3-乳酸和吲哚-3-乙酸可抑制肠道致病菌的生长，改善肠道屏障和免疫功能，而吲哚-3-丁酸还可作为植物生长激素用于果蔬催熟和农产品品质的改良。虽然吲哚衍生物具有重要的生理功能，但其应用存在以下困难：(1)细菌发酵液成分复杂，其中吲哚衍生物难以精准定性定量；(2)肠道细菌产生吲哚衍生物的能力微弱，限制了该物质的进一步利用；(3)肠道是吲哚衍生物在人体发挥功能的主要部位，但吲哚衍生物难以精准有效递送，且难以持续发挥功能。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一株高产吲哚衍生物且具有耐酸耐胆盐特性的罗伊氏乳杆菌及其制备方法与应用，对吲哚衍生物精准定性定量，提升肠道细菌生产和精准递送吲哚衍生物的能力。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了一株高产吲哚衍生物且具有耐酸耐胆盐特性的罗伊氏乳杆菌，该高产吲哚衍生物且具有耐酸耐胆盐特性的罗伊氏乳杆菌的分类命名为罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2022年4月22日，保藏号为CGMCC No.24755。

优选地，所述罗伊氏乳杆菌能够高产的吲哚衍生物包括吲哚-3-乳酸、吲哚-3-乙酸和吲哚-3-丁酸。

本发明还公开了上述一株高产吲哚衍生物且具有耐酸耐胆盐特性的罗伊氏乳杆菌的筛选方法，所述方法具体为：采用MRS培养基对样品进行分离培养，鉴定并筛选出罗伊氏乳杆菌，再通过UPLC-Q-Orbitrap MS/MS方法筛选出高产吲哚衍生物的罗伊氏乳杆菌，进行耐酸耐胆盐能力测定，筛选出高产吲哚衍生物且具有耐酸耐胆盐能力的罗伊氏乳杆菌。

优选地，通过UPLC-Q-Orbitrap MS/MS方法筛选出高产吲哚衍生物的罗伊氏乳杆菌的步骤为：使用Hypersil Gold C18反相色谱柱、电喷雾离子源和Orbitrap质量分析器测定筛选出的罗伊氏乳杆菌样品与吲哚衍生物标准品相同质荷比和保留时间的峰面积，根据测定的标准曲线求得样品中吲哚衍生物的含量，基于吲哚衍生物的含量筛选出高产吲哚衍生物的罗伊氏乳杆菌。