[发明专利]基于编码微球的肿瘤靶点定量PCR检测试剂盒在审
申请号: | 202210722144.2 | 申请日: | 2022-06-24 |
公开(公告)号: | CN114921556A | 公开(公告)日: | 2022-08-19 |
发明(设计)人: | 崔大祥;倪健;刘彬;周诚;刘关;田静;陈晓敏;崔明青 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学;上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6886 | 分类号: | C12Q1/6886;C12Q1/6806;C12Q1/6851;C12N15/11 |
代理公司: | 上海东亚专利商标代理有限公司 31208 | 代理人: | 董梅 |
地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基于 编码 肿瘤 定量 pcr 检测 试剂盒 | ||
1.一种编码微球的组合,其特征在于,所述的编码微球的组合包含至少5个编码微球,这5个编码微球上分别偶联有扩增PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2,PIK3CA的反向引物。
2.根据权利要求1所述的编码微球的组合,其特征在于,与扩增PD-L1, VEGFR, EGFR,Her2,PIK3CA的反向引物偶联的5个编码微球的粒径各不相同;或者
与扩增PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2,PIK3CA的反向引物偶联的5个编码微球是巯基化修饰的CdSe@CdS与CdTe混合物的编码微球。
3.根据权利要求1或2所述的编码微球的组合的制备方法,其特征在于,所述的编码微球的组合包含至少5个编码微球,这5个编码微球分别与扩增PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2,PIK3CA的反向引物偶联。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述的制备方法包括以下步骤:
通过高温热分解法制备CdSe@CdS异质结构四足量子点,控制其吸收谱在蓝-紫光区域,发射谱在红光-近红外区域可调;
采用化学合成方法制备5个不同粒径的CdTe量子点;
利用SPG膜乳化途径制备CdSe@CdS量子点与不同粒径的CdTe混合,制备成5种不同粒径的量子点编码微球;
利用巯基乙酸对制备的量子点编码微球进行修饰,获得5种不同粒径巯基修饰的量子点编码微球;
把5种不同粒径巯基修饰的量子点编码微球,分别与PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2,PIK3CA的反向引物偶联。
5.根据权利要求1或者2所述的编码微球的组合的应用,其特征在于,使用所述的编码微球的组合扩增待测样品核酸,确定待测样品核酸中PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2,PIK3CA的存在、含量或者是否突变。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,包括以下步骤:
S1,获取待测样本,提取RNA进行反转录获得cDNA;
S2,配制PCR反应混合液,包括PCR缓冲液, DNA聚合酶,5种编码微球偶联的引物,5种上游引物,dNTP混合液,cDNA产物,混匀;
S3,进行PCR,获得PCR产物以及PCR仪显示的变性曲线与正常对照曲线;
S4,比对PCR仪显示的变性曲线与正常对照曲线,判定靶基因是否存在突变;
S5,根据PCR仪显示的变性曲线、正常对照曲线或者PCR循环数,或者通过定量PCR产物的方法确定靶基因在待测样本中是否存在以及含量;
其中S4和S5择一或者同时使用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,
RT-PCR的反应条件是:37℃反转录反应15分钟,然后,95℃反应 30s;或者
继续的PCR的反应条件是:①95℃反应5s,②60℃反应15s, ③72℃反应30s,步骤①-③循环28-42次;或者
靶基因突变的判断标准是,根据PCR仪显示的变性曲线与正常对照曲线,判定是否存在基因产物突变。
8.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,PCR结果的判断标准是:
以内对照作为基准,定量检测结果达到20倍以上,认定为靶基因在待测样品中高表达;
定量检测结果达到5-10倍,认定为靶基因在待测样品中等表达水平;
定量检测结果在5倍以内,认定为低表达;
所述的靶基因是PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2或者PIK3CA。
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