[发明专利]基于编码微球的肿瘤靶点定量PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种编码微球的组合，其特征在于，所述的编码微球的组合包含至少5个编码微球，这5个编码微球上分别偶联有扩增PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2，PIK3CA的反向引物。

2.根据权利要求1所述的编码微球的组合，其特征在于，与扩增PD-L1, VEGFR, EGFR,Her2，PIK3CA的反向引物偶联的5个编码微球的粒径各不相同；或者

与扩增PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2，PIK3CA的反向引物偶联的5个编码微球是巯基化修饰的CdSe@CdS与CdTe混合物的编码微球。

3.根据权利要求1或2所述的编码微球的组合的制备方法，其特征在于，所述的编码微球的组合包含至少5个编码微球，这5个编码微球分别与扩增PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2，PIK3CA的反向引物偶联。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：

通过高温热分解法制备CdSe@CdS异质结构四足量子点，控制其吸收谱在蓝-紫光区域，发射谱在红光-近红外区域可调；

采用化学合成方法制备5个不同粒径的CdTe量子点；

利用SPG膜乳化途径制备CdSe@CdS量子点与不同粒径的CdTe混合，制备成5种不同粒径的量子点编码微球；

利用巯基乙酸对制备的量子点编码微球进行修饰，获得5种不同粒径巯基修饰的量子点编码微球；

把5种不同粒径巯基修饰的量子点编码微球，分别与PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2，PIK3CA的反向引物偶联。

5.根据权利要求1或者2所述的编码微球的组合的应用，其特征在于，使用所述的编码微球的组合扩增待测样品核酸，确定待测样品核酸中PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2，PIK3CA的存在、含量或者是否突变。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

S1,获取待测样本，提取RNA进行反转录获得cDNA；

S2,配制PCR反应混合液，包括PCR缓冲液, DNA聚合酶，5种编码微球偶联的引物，5种上游引物，dNTP混合液，cDNA产物，混匀；

S3,进行PCR，获得PCR产物以及PCR仪显示的变性曲线与正常对照曲线；

S4,比对PCR仪显示的变性曲线与正常对照曲线，判定靶基因是否存在突变；

S5,根据PCR仪显示的变性曲线、正常对照曲线或者PCR循环数，或者通过定量PCR产物的方法确定靶基因在待测样本中是否存在以及含量；

其中S4和S5择一或者同时使用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，

RT-PCR的反应条件是：37℃反转录反应15分钟，然后，95℃反应 30s；或者

继续的PCR的反应条件是：①95℃反应5s,②60℃反应15s, ③72℃反应30s，步骤①-③循环28-42次；或者

靶基因突变的判断标准是，根据PCR仪显示的变性曲线与正常对照曲线，判定是否存在基因产物突变。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，PCR结果的判断标准是：

以内对照作为基准，定量检测结果达到20倍以上，认定为靶基因在待测样品中高表达；

定量检测结果达到5-10倍，认定为靶基因在待测样品中等表达水平；

定量检测结果在5倍以内，认定为低表达；

所述的靶基因是PD-L1, VEGFR, EGFR, Her2或者PIK3CA。