[发明专利]一种非诊断目的用于荧光原位杂交检测中精准定位乳腺浸润癌及微小浸润癌的方法

说明书

本发明提供一种非诊断目的用于荧光原位杂交检测中精准定位乳腺浸润癌及微小浸润癌的方法，将免疫组织化学双染色检测及荧光原位杂交检测共同应用在同一张切片上，在同一张切片上先进行免疫组织化学双染色，然后进行荧光原位杂交检测，根据免疫组织化学Fastred显色在荧光显微镜下有明亮的红色荧光，而DAB显色在荧光显微镜下没有荧光的特点，在荧光原位杂交检测片子上精准定位乳腺浸润癌或微小浸润癌的位置。

技术领域

本发明涉及一种非诊断目的用于荧光原位杂交检测中精准定位乳腺浸润癌及微小浸润癌的方法，属于生物技术领域。

背景技术

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，15％～20％的乳腺癌患者存在HER-2基因的扩增和(或)蛋白的过表达，近年来，针对HER-2阳性乳腺癌患者的抗HER-2靶向治疗取得了良好疗效，改善了HER-2阳性乳腺癌患者的预后。正确检测和评定乳腺浸润癌的HER2蛋白表达和基因扩增状态，可筛选适合抗HER2靶向治疗的乳腺癌患者。

目前，各个版本的《中国乳腺癌HER-2检测指南》均推荐使用免疫组织化学的方法检测HER-2蛋白的表达，使用荧光原位杂交的方法检测HER-2基因的扩增水平明确浸润癌区域的HER-2基因状态。各类临床实验显示，大约23％的患者导管原位癌与浸润癌的HER-2状态不一致，目前的指南中强调在病理报告中需要报告的是浸润性癌的HER-2状态，而不是乳腺导管原位癌的HER-2状态。

多数情况下，乳腺浸润性癌与导管原位癌在HE切片显微镜明场镜下形态上容易区分。但一些特殊类型的浸润性癌(特别是浸润性筛状癌和腺样囊性癌)以及有些边界清楚或形成圆形细胞巢的浸润性癌，在形态上均类似乳腺导管原位癌。同时，导管原位癌可累及硬化性病变(特别是硬化性腺病)、累及小叶、病变导管的分支、受累导管或腺泡因纤维化而扭曲、炎症导致病变导管或腺泡结构不清、挤压假象、烧灼影响以及先前穿刺操作造成原位癌进入周围间质或脂肪组织内造成的上皮异位等，这些情况均可使导管原位癌在形态上类似浸润性癌(如图1所示)。另外，若浸润性病灶较小，特别是微小浸润性癌与导管原位癌的鉴别在形态上尤为困难(如图5所示)；只有通过免疫组织化学检测，乳腺导管原位癌周围的肌上皮细胞染上颜色，才能明确分辨出导管原位癌(如图2、图6所示)及浸润癌和微小浸润癌。

荧光原位杂交检测需要在荧光显微镜暗视野下观察结果，在荧光显微镜暗视野下组织切片的病理学形态非常不好辨别，与导管原位癌形态上非常相似的浸润癌(如图3所示)及微小浸润癌(如图7所示)在荧光显微镜下更难识别出来。以往的乳腺癌HER-2检测，都是根据免疫组织化学的片子对浸润性癌进行定位，然后在另一张荧光原位杂交的片子上寻找相应的位置进行判读，由于荧光原位杂交的判读需要使用100倍的油镜判读，视野非常小，寻找浸润癌的区域并精准定位是非常困难的；而且不同切片层面会导致导管原位癌与浸润癌的形状、大小和位置都会出现不同程度的改变，这些原因势必造成荧光原位杂交检测中某些特殊类型的乳腺浸润癌及微小浸润癌定位不准确的情况。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种非诊断目的用于荧光原位杂交检测中精准定位乳腺浸润癌及微小浸润癌的方法，在同一张切片上先进行三种抗体的免疫组织化学双染色，然后再进行荧光原位杂交检测。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种非诊断目的用于荧光原位杂交检测中精准定位乳腺浸润癌及微小浸润癌的方法，在同一张切片上先进行免疫组织化学双染色，然后进行荧光原位杂交检测，根据免疫组织化学Fast red显色在荧光显微镜下有明亮的红色荧光，而DAB显色在荧光显微镜下没有荧光的特点，精准定位乳腺浸润癌或微小浸润癌的位置。

所述免疫组织化学双染色是将乳腺癌石蜡包埋标本切片收在黏附性载玻片上，使用辣根过氧化酶显色系统，选用染色抗体E-Cadherin进行DAB显色，此时乳腺癌细胞浆被染为棕黄色；使用碱性磷酸酶显色系统，选用染色抗体P63、CK5/6进行Fast red显色，此时乳腺导管原位癌周围的肌上皮细胞被染为红色；再用HER-2/CSP17双探针对上述切片进行荧光原位杂交检测。